Imágenes de calcio in vitro en cultivos de hipocampo de rata a corto y largo plazo

Resumen

Source: Calvo-Rodríguez, et al. Imágenes de fluorescencia y bioluminiscencia de Ca style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:0.6em;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>²⁺ en neuronas del hipocampo envejecidas. J. Vis. Exp. (2015).

Este video demuestra el uso de imágenes de fluorescencia para medir los niveles de calcio citosólico en cultivos de hipocampo de ratas a corto y largo plazo. Al comparar neuronas jóvenes y envejecidas, destaca cómo el aumento de la densidad del canal de calcio dependiente de voltaje de tipo L y la activación prolongada en las neuronas envejecidas dan como resultado una sobrecarga de calcio, un sello distintivo del envejecimiento neuronal. Los indicadores fluorescentes de calcio revelan estas diferencias a través de cambios en la intensidad de la fluorescencia tras la estimulación.

Protocolo

1. Cultivo a corto y largo plazo de las neuronas del hipocampo de rata

Resultados

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Neurobasal Culture Medium	Gibco	21103-049
HBSS medium	Gibco	14170-088
Ham's F-12 medium<	31330-038
DNase I (from bovine pancreas)	Sigma	D5025-15KU<
Fetal Bobine Serum	Lonza	DE14-801E
B27	Gibco	17504-044
Gentamicin	Gibco	15750
L-glutamine	Gibco	25030-032
12 mm glass coverslips<	0111520/20012
Papain	Worthington	LS003127
4-well placas multidish	Nunc	176740
Petri plates	JD Catalan s.l.	2120044T
Sterile pipeettes	Fisher Scientific	431030
Fura2-AM	Life Technologies	F1201
Lipofectamine2000	Invitrogen	11668-027
NMDA	Sigma	M3262
Glycine	Sigma	50046
Zeiss Axiovert S100 TV microscope	Carl Zeiss Inc.
Xcite lighting system	EXFO
ORCA ER fluorescence camera<
VC-8 valve controller	Warner Instruments
SH-27B heating sistema	Warner Instruments
Aquacosmos Software	Hamamatsu Photonics

td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Gibcotd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Labolantd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Hamamatsu