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Obtención de imágenes de polisomas aislados del cerebro de un ratón mediante microscopía de fuerza atómica

May 29th, 2025

In This Article

Abstract

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Fuente: Lunelli, L., et. al. Observando los polisomas cerebrales con microscopía de fuerza atómica. J. Vis. Exp.(2016).

Este video muestra la obtención de imágenes de polisomas utilizando microscopía de fuerza atómica. Una lámina de mica recubierta de iones de níquel ancla el ARN con ribosomas unidos. La muestra se lava, se seca y se monta en la platina del microscopio. La punta en voladizo escanea la superficie de la muestra, registrando las desviaciones del láser para mapear la topología. El software se utiliza para corregir distorsiones y visualizar estructuras de polisomas de alta resolución.

Protocol

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Precaución: Para evitar cualquier degradación del ARN de las muestras, prepare todos los tampones utilizando agua ....

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Results

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
CycloheximideSigma1810Preparación de lysate
DNAseIThermo Scientific89836Preparación del lisado
RiboLock RNAse InhibidorLife technologiesEO-0381Preparación of lysate
DEPCSigma40718Preparación of lysate
Triton X100SigmaT8532Preparación de lysate
DTTSigma43815Preparación del lisado
Desoxicolato de SodioSigmaD6750Preparación del lisado
MicrocentrifugeEppendorf5417RPreparación del lisado
SacarosaSigmaS5016Preparación del gradiente de sacarosa
UltracentrifugeBeckman CoulterOptima LE-80KCentrifugación en gradiente de sacarosa
Ultracentrifuge RotorBeckman CoulterSW 41 TiCentrifugación en gradiente de sacarosa
Tubo de polialómeroBeckman Coulter331372Sacarosa centrifugación de gradiente
Density Gradient Fractionation SystemTeledyne Isco67-9000-176Fraccionamiento de gradiente de sacarosa
AFMAsylum ResearchCypherPolysome visualization

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Tags

Atomic Force MicroscopyPolysome ImagingMouse Brain TissueRNA Ribosome ComplexMica Sheet CoatingCantilever Tip ScanningLaser Deflection DetectionImage Acquisition SoftwareNanoscale Resolution ImagingSample Preparation Protocol

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