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Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este video demuestra un método de escaneo de alta resolución y fluorescencia de infrarrojo cercano para medir la expresión de proteínas en el cerebro de los roedores.
Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.
1. Imaging
1. Coloque los portaobjetos en la interfaz de escaneo de infrarrojo cercano con el tejido hacia abajo. Visualice una o varias diapositivas de vidrio a la vez con una herramienta de selección.
2. Diapositivas de imágenes utilizando la configuración de máxima calidad con un desplazamiento de 0 nm y una resolución de 21 μm. El escaneo suele tardar entre 13 y 19 horas, dependiendo del equipo de escaneo utilizado.
3. Importe imágenes en el software de análisis de imágenes (por ejemplo, Image Studio) para verlas y marcar para proteínas semicuantitativas análisis.
2. Análisis de Expresión de Proteínas
1. Abra el software de análisis de imágenes y seleccione el Work Area en el que la imagen fue escaneado.
2. Abra la imagen escaneada en el software de análisis de imágenes para ver el escaneo y ajustar también qué longitudes de onda se ven. como el contraste, el brillo y la ampliación mostrados sin alterar la imagen en bruto o la emisión total cuantificada.
3. Identifique las regiones clave para la cuantificación y seleccione la Analysis tab a lo largo de la parte superior de la página, luego seleccione Draw Rectangle (or Draw Ellipse/ Draw Freehand) para dibujar un rectángulo sobre el área que se va a cuantificar.
4. Para ver el tamaño del rectángulo, seleccione Shapes a lo largo de la parte inferior izquierda de la pantalla, luego seleccione Columns a lo largo de la parte inferior derecha. Añadir Height y width<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal; font-weight:400;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'> columnas para identificar el tamaño de la forma.
NOTA: Es importante controlar el tamaño de la forma al comparar la cuantificación. Se recomienda utilizar formas idénticas colocadas dentro de la ubicación de cuantificación deseada, con el fin de obtener un muestreo preciso de las emisiones para esa región.
5. Luego nombra la forma y repite. Una vez que se muestrean todas las regiones, los datos disponibles de la columns <span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>tab puede ser agregados y analizados.
