Imágenes de bioluminiscencia en un modelo de ratón EAE

Resumen

Source: Schmitz, K., et al., Bioluminiscencia e imágenes en el infrarrojo cercano de la neuritis óptica y la inflamación cerebral en el modelo EAE de esclerosis múltiple en ratones. J. Vis. Exp. (2017).

Este video demuestra el método para visualizar y monitorear la encefalomielitis autoinmune experimental o la inflamación inducida por EAE en el nervio óptico usando Imágenes de bioluminiscencia. Incluye el posicionamiento del ratón, la inyección de reactivos y la captura de imágenes secuenciales para controlar los cambios en la bioluminiscencia a lo largo del tiempo.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Imágenes bioluminiscentes de neuritis óptica e inflamación cerebral

1. Configuración del sistema de imágenes
   1. Realice imágenes in vivo con cualquier equipo que permita el análisis de señales de bioluminiscencia e infrarrojo cercano.
   2. Mantenga a los ratones bajo anestesia con isoflurano al 2 - 2,5% durante todos los procedimientos de diagnóstico por imágenes.
   3. Coloque uno o dos ratones uno al lado del otro en el aparato utilizando los suministros de gas del medio. Coloca la parte superior de la columna vertebral en el centro.
   4. Para evaluar los efectos de la medicación, compare pares de ratones con dos ratones simultáneamente, uno por grupo. Esto es importante para las imágenes bioluminiscentes.
   5. Proteja el sitio de la inmunización con un paño negro y tome una fotografía y una imagen de referencia para evaluar la posición correcta del ratón o ratones. Para todas las imágenes, utilice el enfoque B a una distancia de 6,5 cm de la cámara.
2. Inyección e imagen de la sonda de inflamación bioluminiscente
   1. Utilice la configuración del sistema de imagen in vivo: Epi-BLI, Filtro Em abierto, Bloque de filtro Ex, fstop 1, binning 8, foco B = 6,5 cm, exposición al anuncio 120 s; Tome una imagen de referencia.
   2. Inyecte 100 μL i.p. del reactivo quimioluminiscente listo para usar (40 mg/mL). Mezcle bien antes de llenar la jeringa.
   3. Capture imágenes de bioluminiscencia 5, 10 y 15 minutos después de la inyección. El curso temporal del pico bioluminiscente difiere entre los animales.
      NOTA: El pico ocurrirá de 5 a 10 minutos después de la inyección; Un descenso a los 15 minutos indica que no se necesitan más imágenes. Utilice pares de ratones de grupos de control y tratamiento para eliminar los sesgos menores debidos a los diferentes cursos de tiempo.
   4. Rellena las descripciones relevantes para el experimento. Observe cómo aparece automáticamente un cuadro de diálogo; Incluye información, como la cepa del ratón, el sexo, el punto de tiempo, la hora de la inyección de la sonda, el grupo, etc. Guarde todos los archivos en una carpeta; Tendrán etiquetas de tiempo y todas las descripciones.

Materiales