Ablación neuronal dirigida mediante microscopía de dos fotones en un pez cebra Larava

Resumen

Fuente: Muto, A., et al. Ablación de una población neuronal mediante láser de dos fotones y su evaluación mediante imágenes de calcio y registro de comportamiento en larvas de pez cebra. J. Vis. Exp. (2018)

En este video, Se demuestra un procedimiento de ablación con láser de dos fotones, que permite la destrucción selectiva de neuronas fluorescentes en larvas de pez cebra inmovilizadas con agarosa. Las imágenes de alta resolución antes y después del procedimiento confirman un daño neuronal eficiente, como se observa por la ausencia de fluorescencia.

Protocolo

1. ablación de una subpoblación de neuronas utilizando un microscopio láser de dos fotones

1. ....

Resultados

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
NuSieve GTG Agarose	Lonza	Cat.#50080	baja temperatura de fusión agarosa
6 cm placa de Petri	FALCON	Product#:351007
aguja de disección	AS ONE Corporation	Gato. No. 2-013-01	https://keystone-lab.com/en/item/detail/404142<
LSM7MP	Carl Zeiss		two-photon laser scanning microscope
W Plan-Apochromat 63x/1.0	Carl Zeiss		63X objetivo lens
Imager.Z1	Carl Zeiss		an epi-fluorescence microscope
ZEN	Carl Zeiss		Software de adquisición de imágenes para microscopios confocal
Junta de Cámara de Hibridación de Sellado Seguro, 8 cámaras, 9 mm de diámetro x 0.8 mm de profundidad	Molecular Probes	Catalogue # S-24732	Utilizado como cámara de grabación en Ca imaging
Imageing Chambers	Grace Bio-Labs	CoverWell Imaging Chambers PCI-A-2.5	Utilizado como cámara de registro de comportamiento
Surgical knife	MANI	Cuchillo oftálmico MST15
ORCA-Flash4.0	Hamamatsu Photonics	model:C11440-22CU	a scientific CMOS
HCImage	Hamamatsu Photonics		image acuisition software
Módulo de grabación en disco duro	Hamamatsu Photonics		Un módulo de software que permite guardar los archivos de película en una unidad de disco duro en poco tiempo
SZX7	Olympus		stereoscope
DF PL 0.5X	Olympus		lente objetivo para SZX7
Point Grey Grasshopper3 4.1 MP Mono USB3 Visio	FLIR Systems, Inc.	Product No. GS3-U3-41C6NIR-C	CMOS camera
XIMEA xiQ camera	XIMEA	Product No. MQ042RG-CM	CMOS camera
Un anillo de luz LED	CCS	Model: LDR2-100SW2-LA	White LED
Malla de nylon 32μm	Tokyo Screen	N-No.380T	http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20347/
Malla de nylon 13μm	Tokyo Screen	N-No. 508T-K	http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20347/<
Metal seive apertura de 150 micras	Tokyo Screen		http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20341/#ami
Metal seive 75 micras de apertura	Tokyo Screen		http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20341/#ami
EBIOS	Asahi Food & Healthcare, Co. Ltd.		dry beer yeast
LabVIEW	National Instruments		an integrated development environment for programming
Mai-Tai HP	Spectra Physics		láser de dos fotones

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