Imágenes de células vivas de la migración nuclear glial de Müller durante la regeneración de la retina del pez cebra

Resumen

Fuente: Lahne, M., et.al. Cultivo de explantes de retina de pez cebra transgénico adulto para obtención de imágenes de células vivas mediante microscopía multifotónica. J. Vis. Exp. (2017)

Este video muestra imágenes de células vivas de la migración nuclear glial de Müller en explantes de retina de pez cebra incrustados en agarosa después del daño de los fotorreceptores inducido por la luz. El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) liberado por los fotorreceptores dañados activa las células gliales de Müller, desencadenando la migración nuclear a través de las capas nucleares interna y externa para la mitosis y la generación de progenitores neuronales. Las imágenes capturadas revelan la dinámica de la migración nuclear y la diferenciación de los progenitores durante la regeneración de la retina.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1.

NOTA: Los experimentos realizados en este manuscrito fueron optimizados para un microscopio multifotónico equipado con un láser infrarrojo (ver Tabla de Materiales), un objetivo de inmersión en agua de larga distancia 40X Apo (N.A. 1.15), un escáner galvanómetro y una cámara ambiental que contiene un inserto para cuatro placas de Petri de 35 mm. Las imágenes se adquirieron con un detector no desescaneado (R-NDD).

1. Antes de la toma de imágenes, equilibre la cámara ambiental....

Resultados

Figura 1: Reconstrucción 3D de pilas Z multifotónicas de retina. A) Reconstrucción en 3D de una serie de imágenes multifotónicas z-stack de células gfap:nGFP-positivas en cultivos de retina de montaje completo de pez cebra después de 48.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Fluordish	World precision instruments	FD35-100
Microscopio estereoscópico	Nikon	SMZ-1B	Un tipo similar de microscopio estereoscópico de disección funcionará
con lámparas fluorescentes Sylvania OSFP5835HOECO	Bulbtronics	31850
Índice de refracción líquido	Cargille Lab	1803Y
microscopio multifotónico Nikon A1 equipado con un láser infrarrojo MaiTai	Nikon		Equivalent funcionará
con 40 objetivos de inmersión en agua a larga distancia Apo (N.A. 1.15), cámara ambiental equipada con inserto para placas de Petri de 35 mm	Okolab		Equivalent funcionará con
el software de análisis NIS	Nikon

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