Imágenes microendoscópicas de calcio en tiempo real en un ratón que se mueve libremente

Resumen

Fuente: Lee, H. et. al., Imágenes exitosas de calcio in vivo con un microscopio miniaturizado de montaje en la cabeza en la amígdala de un ratón que se comporta libremente. J. Vis. Exp. (2020)

Este video muestra imágenes de calcio in vivo en un ratón utilizando un índice de refracción de gradiente, o lente GRIN, y un microscopio miniaturizado. La configuración combina la fijación de la cabeza dentro de un sistema de jaula móvil sin fricción, estimulando las neuronas y desencadenando la entrada de iones de calcio. La lente GRIN captura la señalización de calcio en el cerebro, lo que permite la visualización en tiempo real de la actividad neuronal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

NOTA: Este protocolo consta de seis pasos principales: cirugía de inyección de virus, cirugía de implante de lentes con índice de refracción en gradiente (GRIN), validación de la implantación de lentes GRIN, fijación de la placa base, registro óptico de la señal GCaMP (fusión de proteína fluorescente verde (GFP), calmodulina (CaM) y M13, una secuencia peptídica de la quinasa de cadena ligera de miosina) durante una prueba de comportamiento y procesamiento de datos (Figura 1A). Exc....

Resultados

Figura 1: Flujo de trabajo esquemático y diagramas para cirugía estereotáxica para imágenes microendoscópicas de calcio in vivo en la AI. (A) Un flujo de trabajo esquemático de imágenes microendoscópicas de calcio in vivo en la LA. (B) Una imagen microsc.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
26G aguja	BD	302002	Cirugía
AAV1-Syn-GCaMP7b-WPRE	Addgene	104493-AAV1	Cirugía
AAV2/1-CaMKiiα-GFP	Cirugía
a medidaCemento acrílico-dental (Ortho-jet Acrylic Pink)	Lang	1334-pink	Cirugía y fijación de placa base
Manipulador de flujo de aire	Neurotar	NTR000253-04 Fijación de	la placa base
Amoxicilina	SIGMA	A8523-5G
Cirugía Jaula de carbono	Neurotar	180mm x 70mm	Fijación de la placa base
Carprofen	SIGMA	PHR1452-1G	cirugía
Software de procesamiento de datos	INSCOPIX	Software de procesamiento de datos INSCOPIX	Fijación de la placa base y prueba de comportamiento
Dexametasona	SIGMA	D1756-500MG	Fresa de cirugía
	Seyang	marathon-4	Fresa de cirugía
	ELA	US1/2, Shank104	Cirugía
Aguja de vidrio	WPI	PG10165-4	Cirugía
Lente GRIN (INSCOPIX Proview Lens Probe)	INSCOPIX	1050-002208
Cirugía Hamilton Jeringa Hamilton		84875	Cirugía
Placa de cabeza	Neurotar	Model 5	Cirugía
Ordenador portátil	Samsung	NT950XBV	Surgery
Soporte para lentes, Varilla estereotáxica (kit de implantes INSCOPIX proview)	INSCOPIX	1050-004223	pinza
microscopio	quirúrgico INSCOPIX	1050-002199 Fijación de	placa base
Microscopio, software DAQ, hardware	INSCOPIX	nVista 3.0	Fijación de placa base y prueba de comportamiento
homecage	Neurotar	MHC V5	Fijación de placa base
motizado	Neurostar	Cirugía personalizada
Software de brazo moteado	Neurostar		Cirugía personalizada
Adhesivo epoxi removible	WPI	Kwik-Cast	Cirugía
Cemento de resina (Super-bond)	Sun medical	Super bond C&B
Cirugía Tornillo de cráneo	Stoelting	51457	Cirugía
Marco estereotáxico	Stoelting	51600	Cirugía
Manipulador	estereotáxicoStoelting	51600	Fijación de placa base

para Mobil brazo