Microscopía holográfica de dos fotones para estudiar la actividad neuronal y la conectividad en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Kato, D. et. al., Evaluación y manipulación de la actividad neuronal mediante microscopía holográfica de dos fotones. J. Vis. Exp. (2022)

Este video muestra la técnica de imagen de dos fotones combinada con optogenética utilizando microscopía holográfica. Utilizando un modulador de luz espacial, esta técnica permite una estimulación neuronal precisa que expresa la proteína sensible a la luz roja y las imágenes de calcio con un fotodaño mínimo. Este enfoque proporciona información sobre la conectividad funcional y la organización de las redes neuronales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Implante de la placa cefálica (Figura 1A)

1. Administrar el anestésico (una mezcla de 74 mg/kg de ketamina y 10 mg/kg de xilacina) por vía intraperitoneal para anestesiar al ratón. Compruebe el estado anestésico del ratón con frecuencia evaluando los reflejos del pedal.
2. Después de la anestesia, coloque el ratón en un instrumento estereotáxico. Aplique un ungüento para los ojos (consulte la tabla de materiales) para evitar que la córnea se seque cuando se implant....

Resultados

Figura 1: Esquema esquemático del procedimiento experimental. (A) Fijación de la placa de la cabeza al cráneo. (B) Inyección estereotáctica de AAV en el área de la pata trasera de la corteza somatosensorial primaria (S1H.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
25x Objetivo	Nikon	N25X-APO-MP	Objetivo
A1MP	Nikon	A1MP	Microscopio
AnesII	Bio maquinaria	AnesII AnesII	Sistema de administración de anestesia
C2 plus	Nikon	Microscopio	C2 plus
DECADRON inyección de fosfato	Aspen	21N024	Evita el edema cerebral
Taladro dental	Jota	C1. HP.005	Taladro dental
Microinyector eléctrico	NARISHIGE	IM-31 Sistema de	inyección a presión
Feathers	FEARGER	FA-10	Afeitado
G-CEM one imprimación potenciadora del adhesivo	GC	2110271	Imprimación de cemento de resina para la adherencia dental
G-CEM ONE neo	GC	43093	Cemento de resina para la adherencia dental
Capilar de vidrio con filamento	NARISHIGE	GDC-1	Capilar de vidrio
Detector de imagen	Hamamatsu	H10770PA-40	GaAsP fotocátodo fotomultiplicador
tubo Software de imagen	Nikon	NISelements	Software
de imagen Solución de inhalación de isoflurano	Pfizer	229KAR	Anestésicos
iXon Cámara EMCCD	Andor	iXon Life 888	Imagen
sensor Ketamina	daiitisannkyou	s9-018506	Anestésicos
Leica-M60	Estereoscopio	Leica	M60
Linicon	Linicon	LV-125	Bomba
de vacío Modo bloqueado Ti:zafiro chameleon ultra II		Chameleon Discovery NX	Femtosegundo
Mos-cure	U-VIX	mini 365	Portable LED Fuente de luz UV
PEN brillante	SHOFU INC.	PEN Bright	Unidad de fotopolimerización dental
Puller	SUTTER instaument	P-97	Puller
Instrumento estereotáxico (para ratones)	NARISHIGE	SR-6M-H	Instrumento estereotáxico
Micromanipulador estereotáxico	NARISHIGE	SM-15R	Micromanipulador estereotáxico
Super-bond CATALYST V	SUN MEDICAL	8070	Cemento de resina adhesivo dental
Monómero adhesivo dental superadherente	SUN MEDICAL	8071	Monómero adhesivo dental
Polvo de polímero de color para dientes superadherente	SUN MEDICAL	145052000	Polvo de polímero de color para dientes
Ungüento oftálmico Tarivid 0.3%	Santen Pharmaceutical TRN3952		ungüento para los ojos
UlTIMATE XL	NSK		Unidad de control de micromotores para laboratorio dental
Adhesivos ópticos de curado UV	THORLABS	NOA61	Adhesivos ópticos de curado UV
Xilacina	Bayer	KP0F2BK	Anestésicos

láser coherente Y141446