Una técnica para la aspiración y el procesamiento percutáneo de espermatozoides del epidídimo

Resumen

Este video muestra la aspiración percutánea de espermatozoides del epidídimo de un paciente con azoospermia, una condición caracterizada por la ausencia de espermatozoides en el semen. El procedimiento consiste en desinfectar el área escrotal, aspirar el líquido epididimario con una jeringa con una solución de cultivo especializada y procesar la muestra recolectada para aislar espermatozoides viables. Los espermatozoides preparados están listos para su uso en procedimientos avanzados de tratamiento de infertilidad.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de conformidad con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Preparación preoperatoria

1. Preparación de suministros quirúrgicos
   1. Prepare los suministros necesarios para el procedimiento quirúrgico, incluido un paquete de instrumentos quirúrgicos, dos jeringas de 5 ml equipadas con una aguja de 0,7 mm (0,7 x 32 Thin Wall Long Bevel (TWLB)), 60 mL de solución desinfectante, dos pares de guantes de goma estériles y una pieza de apósito adhesivo estéril.
   2. Pida a las enfermeras que examinen el paquete de instrumentos quirúrgicos sometido a esterilización por vapor a alta presión para detectar cualquier daño o caducidad. Una vez que se haya confirmado que no hay ningún problema, colóquelo en la mesa de instrumentos y abra la capa exterior.
   3. Para los andrólogos: póngase guantes de goma estériles, luego abra la capa interna del paquete de instrumentos quirúrgicos para verificar si la cinta indicadora de esterilización está calificada o no, así como asegurarse de que todos los instrumentos internos estén completos.
   4. Prepare dos jeringas de 5 ml equipadas con agujas de 0,7 mm (0,7 x 32 TWLB) para la anestesia y la cirugía, y luego abra la ampolla que contiene la inyección de lidocaína.
   5. Utilice una jeringa estéril de 5 ml para aspirar la inyección de lidocaína, eliminando posteriormente las burbujas de aire de la jeringa.
2. Preparación del paciente que se somete a cirugía
   1. Organizar la preparación de la piel para el paciente. Afeita el pubis del perineo con una maquinilla de afeitar desechable y lava el perineo y la piel circundante con agua jabonosa para asegurarte de que no haya exceso de pubis ni manchas.
   2. Coloque al paciente en la mesa de operaciones en posición de litotomía, quítese los pantalones y asegure la prenda superior por encima del ombligo para exponer completamente el perineo y la parte inferior del abdomen por debajo del ombligo.
   3. Ajuste el ángulo de la lámpara sin sombras para iluminar el escroto del paciente.
   4. Utilice pinzas ovaladas para agarrar una bola de gasa estéril, que luego se sumerge completamente en una solución desinfectante para iniciar el proceso de desinfección. Realizar la desinfección de la piel desde la periferia hasta el escroto en el siguiente orden: abdomen inferior, frente e interna de los muslos, zona perineal, pene y escroto.
   5. Después de la desinfección inicial, reemplace la bola de gasa estéril y repita el proceso de desinfección. Después de tres rondas de desinfección, se completa el proceso de desinfección preoperatoria.
   6. Inicie el proceso de colocación de toallas estériles una vez finalizada la desinfección. Primero, coloque una toalla cuadrada estéril debajo de los glúteos del paciente, luego extienda una toalla estéril con orificios alrededor del área quirúrgica y sus alrededores, exponiendo completamente el escroto en el área del orificio.
3. Preparación de la solución de cultivo G-MOPS-PLUS
   1. Pida a los técnicos de la sala de cultivo embrionario que transfieran aproximadamente 2 mL de solución de cultivo G-MOPS-PLUS a la placa de cultivo utilizando una pipeta Pasteur estéril. Cierre correctamente la tapa y, posteriormente, entréguela a la enfermera en el quirófano a través de la ventana de transferencia.
   2. Coloque la placa de cultivo en la toalla estéril de la mesa de instrumentos y abra la tapa.
   3. Con otra jeringa de 5 mL, aspire aproximadamente 0,2 mL de solución de cultivo G-MOPS-PLUS y, posteriormente, elimine las burbujas de aire para su uso futuro.

2. Anestesia y cirugía

1. Para los andrólogos: sostenga la jeringa llena de lidocaína inyectable en la mano derecha mientras fija el cordón espermático del paciente con la mano izquierda. Punción subcutánea e inyecte una pequeña cantidad de lidocaína para formar una roncha. A continuación, punción subcutánea y profundización en el tejido del cordón espermático, comenzando a inyectar aproximadamente 0,5 mL de lidocaína después de confirmar que no hay retorno sanguíneo. Para lograr un mejor efecto de la anestesia con bloqueo de cordón espermático, cambie la dirección de la aguja de inyección de 2 a 3 veces en el mismo punto de punción y repita la operación de inyección de lidocaína en el cordón espermático.
2. Sujetar el escroto del paciente con la mano izquierda, asegurando el epidídimo que requiere punción. Mediante la palpación, confirmar la ubicación del epidídimo donde se necesita la punción quirúrgica con la mano derecha. Luego, sostenga la jeringa que contiene lidocaína mencionada anteriormente e inyéctela debajo de la piel en el sitio de punción para lograr la anestesia de infiltración local.
3. Sujetar el escroto del paciente con la mano izquierda, asegurando el epidídimo que requiere punción. A continuación, sujete la jeringa de 5 mL que contiene la solución de cultivo G-MOPS-PLUS (0,2 mL) en la mano derecha y punción perpendicular a la piel, penetrando en el tejido del epidídimo. Mantenga la presión negativa en la jeringa y perfore repetidamente el tejido del epidídimo para que el líquido del epidídimo ingrese a través de la aguja bajo el efecto de la presión negativa.
4. Continúe manteniendo la presión negativa y retire lentamente la aguja de punción. Inyecte el líquido epididimario extraído en la placa de cultivo. Después de completar la inyección, aspire la solución de cultivo G-MOPS-PLUS cercana para enjuagar la jeringa con el fin de maximizar la cantidad de líquido epididimario recolectado inyectado en la placa de cultivo.

3. Tratamiento de especímenes quirúrgicos

1. Búsqueda y observación de espermatozoides del epidídimo
   1. Transfiera la placa de cultivo que contiene el líquido de cultivo G-MOPS-PLUS y el líquido epididimario al técnico del laboratorio de embriones a través de la ventana de transferencia.
   2. Los técnicos de la sala de cultivo embrionario se hacen cargo de la placa de cultivo y la colocan en la plataforma de un microscopio óptico invertido, asegurándola. Encienda el interruptor de encendido del microscopio y gire el botón de ajuste de luz a una intensidad de luz adecuada.
   3. Gire el convertidor del microscopio óptico invertido, seleccione la lente del objetivo 10x, gire las espirales de enfoque grueso y fino a su vez para ajustar la distancia focal. Observe la situación de enfoque y busque espermatozoides del epidídimo bajo el microscopio.
   4. Continúe girando el convertidor del microscopio invertido a la lente del objetivo de 40x, gire la espiral de enfoque fino para ajustar la distancia focal y observe los espermatozoides del epidídimo campo por campo. Evaluar el número y la calidad de los espermatozoides del epidídimo. Se puede ver que los espermatozoides del epidídimo normal han madurado y obtenido la capacidad de moverse.
2. Tratamiento de los espermatozoides del epidídimo
   1. Al observar suficientes espermatozoides del epidídimo activos, transfiera el líquido en la placa de cultivo a un tubo de centrífuga de 15 mL a través de una pipeta Pasteur estéril.
   2. Coloque el tubo de centrífuga anterior en la bandeja de equilibrio y use un tubo de centrífuga de la misma especificación que contenga agua estéril para nivelar.
   3. Abra la puerta de la centrífuga, coloque los tubos de la centrífuga en la ranura de la tarjeta simétricamente y, a continuación, cierre la puerta de la centrífuga. Ajuste la fuerza centrífuga a 500 x g y el tiempo de centrifugación a 5 min a través del panel de control. Presione el botón START en el panel de control para iniciar el proceso de centrifugación.
   4. Una vez completado el proceso de centrifugación, abra la puerta de la centrífuga y retire el tubo de centrífuga que contiene el líquido epididimario. Desenrosque la tapa, aspire suavemente el sobrenadante con una pipeta Pasteur estéril y deseche el sobrenadante extraído.
   5. Utilizando una pipeta Pasteur estéril, transfiera aproximadamente 2 mL de solución de cultivo G-IVF-PLUS al tubo de centrífuga. A continuación, pipetee suavemente la solución en el tubo de centrífuga para volver a suspenderla completamente.
   6. Repita los procesos de equilibrado, centrifugación y eliminación de la capa superior de líquido.
   7. De acuerdo con las necesidades de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), transfiera aproximadamente 0,5 ml de solución de cultivo G-IVF-PLUS al tubo de centrífuga utilizando una pipeta Pasteur estéril y sople suavemente los espermatozoides del epidídimo en el fondo del tubo de centrífuga para que queden completamente suspendidos.
   8. Utilice los espermatozoides epididimarios completamente suspendidos directamente para el proceso ICSI.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440	Max RPM: 4000; RCF máx.: 2826 x g
Centrifuge tube	Falcon	352095	15 mL
Combination test tube stand	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Culture dish	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
Solución desinfectante	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Sweden AB	511574	para el tratamiento de fluidos del epidídimo
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	solución de cultivo para la operación de punción
High Security Embryo Pasteur Pipetes	Darwin	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table		DZ202012010
Inverted optical microscope	OLYMPUS		IX71
inyección de clorhidrato de lidocaína		Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854	JYT-2
Medical surgical masks	Ciudad de Guangzhou Distrito de Panyu Fábrica de materiales de salud de Haozheng	161220328	17.5×9.5 cm(unfold size 17.5×17 cm)
Mesa de operaciones accionada por motor	Shandong Mingtai Medical Equipment Co., LTD	YZB0089-2011	operation table<
Self-Adhesive Wound Dressing	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
Jeringas hipodérmicas estériles para un solo uso	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 mL, equipado con un 0.7mm (0.7 x 32TWLB)
Guante quirúrgico de látex estéril sin polvo	Beijing Ruijing Latex Products Co., LTD	2023030322	71/2, 61/2
Surgical instruments package<	10228376	autoclave sterilization
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Vertical flow clean table<	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

tr style='height:20px;'>td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Departamento de Suministros del Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Sun Yat-sentd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Suzhou Wanda Purification Technology Co., LTD