Encapsulación del factor de crecimiento nervioso en nanopartículas que imitan a las lipoproteínas de alta densidad

Resumen

Fuente: Zhu, J., et. al., Preparación y caracterización de nuevas nanopartículas que imitan el HDL para la encapsulación del factor de crecimiento nervioso. J. Vis. Exp. (2017)

Este video demuestra el ensamblaje paso a paso de nanopartículas que imitan HDL cargadas con NGF utilizando encapsulación asistida por protamina y autoensamblaje basado en lípidos para posibles aplicaciones de administración neurotrófica.

Protocolo

1. Preparación de nanopartículas que imitan a NGF HDL

1. Disuelva los excipientes, fosfatidilcolina (PC), esfingomielina (SM), fosfatidilserina (PS), oleato de colesterol (CO) y succinato de D-α-tocoferol polietilenglicol (TPGS), en etanol para preparar soluciones madre a 1 mg / mL.
   NOTA: Las soluciones madre se alícuotas y se almacenaron a -20 ° C. El oleato de colesterol se almacenó en botellas oscuras. Las soluciones madre de PC, SM, PS y CO se mantuvieron estables hasta por 6, 3, 12 y 12 meses, respectivamente, a -20 °C. La solución de TPGS fue estable durante al menos 12 meses a -20 °C.
2. Mezcle 10 μL de NGF (1 mg/mL en agua) con 10 μL de protamina USP (1 mg/mL en agua) en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL y déjelo reposar durante 10 min a temperatura ambiente para formar el complejo.
   NOTA: Las soluciones madre de NGF y protamina se alícuotas y se almacenaron a -20 °C. No se recomienda la congelación y descongelación repetidas para el stock de NGF.
3. Agregue 59 μL de PC, 11 μL de SM, 4 μL de PS, 15 μL de CO y 45 μL de TPGS a un vial de vidrio. Mezclar y evaporar el etanol bajo un suave chorro de nitrógeno durante unos 5 min; Todos los excipientes deben formar una película delgada y aceitosa en el fondo del vial de vidrio.
4. Agregue 1 ml de agua ultrapura (tipo 1) al vial y homogeneice a 9.500 rpm (8.600 x g) durante 5 minutos a temperatura ambiente para formar las nanopartículas prototipo (NP).
5. Añadir el complejo preparado en el paso 1.2 a las NP prototipo e incubar a 37 °C durante 30 min con agitación utilizando una pequeña barra de agitación en el vial de vidrio.
6. Enfríe las NP revolviendo a temperatura ambiente durante otros 30 min. Después de que se enfríe, agregue 106 μL de Apo A-I (1,49 mg / ml) y revuelva a temperatura ambiente durante la noche para formar las NP finales que imitan a NGF HDL.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Recombinant Human Beta-NGF	Creative Biomart	NGF-05H
L-a-Fosfatidilcolina (PC)	Avanti	131601P	95%, Huevo,
Pollo Esfingomielina (SM)	Avanti	860062P	Cerebro,
Fosfatidilserina porcina (PS)	Avanti	840032P	Cerebro,
oleato de colesterilo porcino (CO)	Sigma	C9253
Succinato de polietilenglicol D-α-tocoferilo (TPGS)	BASF	9002-96-4	Succinato de polietilenglicol de vitamina E
Sulfato de protamina	Sigma	P3369	cumple con las especificaciones
de prueba de la USPApolipoproteína A1, plasma humano	Atenas Investigación y Tecnología	16-16-120101	1mg en 671 μl 10 mM bicarbonato de amonio, pH 7.4
Homogeneizador	Tekmar	T 25-S1
Homogeneizador Polytron	Kinematica	PT 1200C