Inyección estereotáxica de vectores virales para la reprogramación de células gliales en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Pereira, M. et. al., Reprogramación directa in vivo de células gliales residentes en interneuronas mediante inyección intracerebral de vectores virales. J. Vis. Exp. (2019)

Este video demuestra la inyección estereotáxica de un virus adenoasociado en la corteza cerebral de un ratón transgénico para administrar genes reporteros fluorescentes y de reprogramación neuronal dependientes de Cre en células gliales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Inyección de factores de reprogramación en la

1. configuración del animal cerebral, colocación estereotáxica y perforaciónNOTA: Este protocolo se centra en el uso de Ascl1, Lmx1a y Nurr1 (ALN) para la reprogramación de la glía NG2 (antígeno neuronal-glial 2) en interneuronas. En nuestra experiencia, las interneuronas de un fenotipo similar se pueden obtener utilizando otras combinaciones de factores
   1. Mueva el brazo M/L-D/V del marco e....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Animal model
NG2-Cre ratones Jackson		NG2-CrexB6129, Stock #008533
Reactivos
Solución salina de agua
	Apoteket AB		70%
Etanol	Solveco
Isolfurane	Apoteket AB		Diluir al 1% con agua tibia
Virkon	Viroderm	7511
Pentobarbital	Apoteket AB	P0500000	i.p. para procedimiento terminal a la dosis de 60 mg/ml
Sacarosa	Merck	S0389-500G
Trypan Blu	Thermo Fisher Scientific	15250061
Retrobeads	Lumafluor	R170
Buprenorphine	Apoteket AB
Equipos			de RSG
Tijeras	VWR	233-1552	De Biochem
Pinzas	VWR	232-0007
Pinza	VWR	232-0120
Soporte para bisturí	VWR	RSGA106.621	Número 20
Bisturí	VWR	RSGA106.200
Marco estereotáxico	Stoelting Europe	51500D
Barras para los oídos de ratón	Stoelting Europe	51648	5 ul
Jeringa con aguja extraíble	Hamilton Company	65	0.75 diámetro interior y 1.5 diámetro exterior.
Capilares de vidrio	Stoelting	50811
Extractor capilar de vidrio	Sutter company	P-1000
Taladro dental	Agnthos AB	1464
Afeitadora	Agnthos AB	GT420
Cámara y bomba de isoflurano	Agnthos AB	8323101	2 mL
Jeringas	Merck	Agujas Z118400-30EA	25G
	Merck	Z192414 Aldrich
Adaptador de ratón y rata neonatal para marco estereotáxico	Stoelting	51625
Almohadilla térmica	Braintree scientific, inc	53800M
Gasa de algodón	Fisher Scientific	22-037-902
Tubo de goma	Elfa Distrelec	HFT-A-9.5/4.8 PO-X BK 150
Hisopos de algodón	Fisher Scientific	18-366-473

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