Tratamiento intracerebroventricular con resiniferatoxina para la desensibilización a TRPV1 en el cerebro del ratón

Resumen

Fuente: Fukushima, A., et al. Tratamiento intracerebroventricular con resiniferatoxina y pruebas de dolor en ratones. J. Vis. Exp. (2020)

Este video demuestra el procedimiento para la inyección intracerebroventricular de resiniferatoxina en ratones para desensibilizar los receptores TRPV1 en el cerebro.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Inyección intracerebroventricular de RTX

1. Anestesiar a los ratones con sal de pentobarbital sódico (60 mg / kg, por vía intraperitoneal) y verificar la pérdida del reflejo de enderezamiento.
2. Para el tratamiento intracerebroventricular (i.c.v.), inyecte 5 μL de resiniferatoxina (RTX) (20 μg/mL) en el ventrículo lateral derecho. Para el grupo de control, inyecte el vehículo (10% etanol, 10% polioxietileno (20) monooleato de sorbitán y 80% líquido cefalorraquídeo artificial (ACSF)) de la misma manera.
   1. Pase una aguja desechable de 27-G a través de un tubo de metal (0,8 mm de diámetro interior) para exponer la punta de 3,0-3,5 mm de la aguja (Figura 1A).
   2. Desinfecte la cabeza del ratón con alcohol al 70% y sujete firmemente los huesos escamosos del ratón con los dedos (Figura 1B). nota: Preste atención a las posiciones de las protuberancias escamosas, ya que estas protuberancias servirán como puntos de referencia para la inyección.
   3. Mueva la aguja lateralmente sobre el cuero cabelludo y busque la sutura sagital mientras la punta de la aguja se engancha en la sutura.
   4. Mueva la punta aproximadamente 1 mm hacia la derecha, luego mueva la punta rostralmente y busque la sutura coronal. (Figura 1B).
   5. Inserte la aguja lenta y verticalmente, inyecte la solución RTX en unos 10 segundos y manténgala presionada durante unos 10 segundos.
   6. Retire la aguja lentamente y devuelva al ratón a su jaula de origen. El sangrado suele ser mínimo o ausente. Si se produce un sangrado importante, se debe considerar el uso de otro ratón.

Resultados

Figura 1: Vistas fotográficas y esquemáticas de la inyección intracerebroventricular (i.c.v.). (A) Aguja utilizada para inyección i.c.v. (B) Esquema del cráneo del ratón y el movimiento de la punta de la agu...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	utilizado para pretratamientos s.c./i.c.v. y la prueba RTX
Sal de pentobarbital sódica	Chemical Industry	P0776	utilizada para anestesia
Etanol (99,5%)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	utilizado para disolver RTX
Polioxietileno (20) Monooleato de sorbitán	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	utilizado para disolver RTX
25 mL Microjeringa	Hamilton	1702LT	utilizado para inyección i.c.v.
Aguja desechable de calibre 26	TERUMO	NN-2613S	utilizada para inyección i.c.v.

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