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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.
- Oclusión de la arteria cerebral media (MCAO):
- Coloque y fije el ratón anestesiado (con una sonda de flujometría doppler láser (LDF) conectada a su cráneo) en posición supina y mantenga su temperatura corporal utilizando una lámpara de calor durante toda la cirugía. Desinfectar el cuello con alcohol etílico al 70%.
- Haga una incisión paramediana en la piel del cuello con un bisturí; diseccione los tejidos blandos con fórceps para exponer los vasos. Agregue una gota de solución salina a los tejidos expuestos para mantenerlos hidratados.
- Diseccionar la arteria carótida común del tejido circundante y el nervio vago con fórceps oftálmicos. Tenga cuidado de no dañar el nervio vago. Desinfecte la piel del cuello nuevamente con yodóforo después de que la arteria carótida común esté expuesta.
- Coloque una pinza de microvasos en el extremo distal de la arteria carótida común y luego haga un nudo muerto con 6-0 suturas de seda en el extremo proximal. Coloque la pinza lo más proximal posible para operaciones posteriores. Asegúrese de que la longitud del recipiente entre la abrazadera y el nudo muerto sea lo más larga posible para operaciones posteriores.
- Haga una sutura temporal proximal a la pinza haciendo un nudo suelto. Asegúrese de que haya suficiente espacio entre dos nudos para la inserción de monofilamentos.
- Hacer una pequeña incisión longitudinal entre los dos nudos con unas tijeras microoftálmicas. Asegúrese de que la incisión esté lo más cerca posible del nudo muerto para operaciones posteriores. Tenga cuidado de no cortar el recipiente.
- Inserte un monofilamento de punta roma de 12 mm a través de la incisión para ingresar a la luz de la arteria y avanzarla unos mm. Apriete el nudo suelto alrededor de la punta del monofilamento y luego retire la abrazadera.
- Avance el filamento hacia la arteria carótida interna (10 mm para ocluir la arteria cerebral media) con pinzas oftálmicas hasta que el software LDF muestre una disminución brusca (reducción del >80% del flujo sanguíneo basal) en el flujo sanguíneo. Registre la hora de inicio de la oclusión.
- Ocluir la arteria cerebral media durante 1 h. Cortar la sonda LDF y poner a los ratones en una incubadora a 30 °C durante la oclusión.
- Reperfusión y postacondicionamiento ácido (APC):
- Vuelva a anestesiar a los animales con isoflurano como se describió anteriormente, 55 min después del tiempo de inicio de la oclusión. Coloque y fije los ratones en posición supina. Abra la incisión del cuello y vuelva a exponer la arteria carótida común.
- Tire suavemente del filamento con pinzas oftálmicas después del período de oclusión para lograr la reperfusión y convierta la sutura temporal en permanente apretando el nudo.
- Para el tratamiento de la acidosis, cambie el gas inhalado por el cono nasal a la mezcla de gases que contienen 20% de CO2, 20% de O2 y 60% de N2 durante 5 min a los 5, 50 o 100 min después de la reperfusión. Cierre la incisión con una sutura quirúrgica interrumpida.
- Coloque a los ratones en una jaula de calor a 30 ° C hasta que recuperen la conciencia y luego devuélvalos a jaulas individuales limpias. Proporcione a los ratones una placa de Petri con agua y comida humedecida. Supervise de cerca a los ratones después de la cirugía para detectar dolor excesivo y muerte.