Visualización de trombos cerebrales de ratón mediante imágenes de fluorescencia en el infrarrojo cercano

Resumen

Fuente: Kim, D. E., et al. Imágenes fluorescentes combinadas de infrarrojo cercano y tomografía microcomputarizada para visualizar directamente los tromboémbolos cerebrales. J. Vis. Exp. (2016)

Este video muestra imágenes fluorescentes de infrarrojo cercano (NIRF) para visualizar trombos en tejido cerebral extirpado marcado con una sonda específica de fibrina. La luz infrarroja cercana excita la sonda, lo que hace que el trombo emita fluorescencia, lo que permite la visualización de trombos de alto contraste en la arteria cerebral principal y los pequeños vasos sanguíneos corticales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal correspondiente.

1. Imágenes fluorescentes fluorescentes de infrarrojo cercano (NIRF) ex vivo del tejido cerebral Después de la

1. decapitación, retire el cuero cabelludo y corte el cráneo con unas tijeras desde el foramen magnum hacia la sutura sagital. Retire la bóveda craneal elevando cuidadosamente los bordes del cráneo inciso con unas tijeras mientras evita lesiones en el cerebro subyacente, dejando así al descubierto los hemisferios.
2. Corte los nervios ópticos en la base del cerebro lo más cerca posible de la superficie del cerebro porque podrían superponerse con el círculo de arterias de Willis (COW) que deben visualizarse en imágenes fluorescentes de infrarrojo cercano (NIRF). Luego, para visualizar la 'arteria cerebral media (MCA) / arteria cerebral anterior (ACA) / arteria carótida interna distal (ICA)' en forma de Y para la imagen del trombo NIRF, corte los ICA distales lo más lejos posible de la superficie del cerebro después de comprimir suavemente la base cerebelosa para exponer los puntos de corte (Figura 1A).
3. Realice imágenes NIRF (excitación/emisión, 675 / 690 nm; exposición de 1 segundo) del tejido cerebral extraído con su base apuntando hacia arriba (Figura 1B, C), que visualiza los tromboémbolos marcados con fluorescencia en las arterias del COW (Figura 1D). Luego, realice imágenes adicionales con el vértice del cerebro apuntando hacia arriba, lo que visualiza los tromboembolios corticales. Evite secar el cerebro poniendo unas gotas de solución salina en el tejido.

Resultados

Figura 1: Descripción general de las imágenes fluorescentes de infrarrojo cercano (NIRF) ex viv o de tromboémbolos cerebrales. (A y B) Se extrajo un tejido cerebral representativo de un ratón con un accidente cere...

Materiales