Transfección mediada por electroporación de ganglios de la raíz dorsal de ratón para promover la regeneración sensorial de axones

Resumen

Fuente: Li, Q. et al. Investigación de la regeneración de axones de mamíferos: electroporación in vivo del ganglio de la raíz dorsal de ratones adultos. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra la transfección mediada por electroporación de neuronas DRG de ratón para estudiar la regeneración de axones. Describe los pasos para administrar construcciones de ácido nucleico a las neuronas DRG, inducir la lesión del nervio ciático y evaluar la regeneración axonal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Inyección del ganglio de la raíz dorsal (DRG)
   1. Inyecte una solución anestésica (diluya avertina en solución salina estéril a una concentración final de 20 mg/ml, con avertin 200 mg/kg de peso corporal) por vía intraperitoneal para mantener la anestesia antes de la inyección de DRG.
   2. Cargue los plásmidos de ácido desoxirribonucleico (ADN) u oligos de ácido ribonucleico (ARN) (1 μL por DRG) en la pipeta capilar de vidri....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
ECM 830 Sistema de electroporación de onda cuadrada	BTX Harvard Apparatus	45-0052	Para electroporación in vivo
Electrodos Tweezertrodes	BTX Harvard Apparatus	45-0524	Para electroporación in vivo, 1 mm plano
Picospritzer III	Parker Instrumentation	1096	Sistemas de dispensación de microinyección intracelular
Capilares de vidrio de borosilicato	World Precision Instruments, Inc.
Microscopio de disección estéreo	Leica	M80
Pinzas de microcirugía	FST por DUMONT, Suiza	11255-20	Solo para aplastamiento del nervio ciático
Glass Capillary	World Precision Instruments, Inc.	TW100-4	10 cm, cinta de pared estándar
	Fisherbrand	15-901-30	Para fijar el ratón en el tablero de corcho
2, 2, 2-Tribromoetanol (Avertin)	Sigma-Aldrich	T48402	Avertin solución madre
2-metil-2-butanol	Sigma-Aldrich	152463	Avertin solución madre
siRNA Fluorescente Universal Negativo Control #1	Sigma-Aldrich	SIC003	ARNip no objetivo con
microARN de fluorescencia Control de transfección mímica con Dy547	Dharmacon	CP-004500-01-05	MicroARN no objetivo con
fluorescencia Kit de preparación de plásmidos	Invitrogen Purelink	K210016	Preparación de plásmidos codificantes de GFP
Colorante verde rápido	Millipore-Sigma	F7252	Para una mejor visualización del contorno del DRG durante la inyección
Ketamine	Putney, Inc	NDC 26637-731-51	Inducción de anestesia
Xilacina	AnaSed	NDC 59399-110-20	Inducción de anestesia
Acetaminofén	McNeil Consumer Healthcare	NDC 50580-449-36	Alivio del dolor posquirúrgico

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