Cuantificación de espinas dendríticas mediante imágenes de microscopía confocal

Abstract

Fuente: Gouder, et. al. Cuantificación tridimensional de espinas dendríticas a partir de neuronas piramidales derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos. J. Vis. Exp. (2015).

Este video demuestra la obtención de imágenes y el análisis de espinas dendríticas en neuronas piramidales transducidas e inmunomarcadas mediante microscopía confocal. Se reduce el ruido de fondo y se rastrean las dendritas estimando su diámetro y longitud. La segmentación automatizada de la columna vertebral implica establecer parámetros para las dimensiones de las dendritas y la columna vertebral y clasificar las espinas. Se genera y exporta un modelo 3D para su análisis.

Protocol

1. Cultivo neuronal

1. Trate las placas de cultivo de 6 pocillos con cubreobjetos de vidrio con poliornitina (diluida a 1/6 en solución salina tamponada con fosfato (DPBS) de Dulbecco, concentración de stock del 0,01%) durante la noche (O/N), seguido de tres lavados en DPBS. A continuación, añadir laminina (concentración de stock 1 mg/ml, diluida 500 veces en DPBS) durante al menos 10 horas bajo la campana de flujo.
2. Colocar en placa y enviar células madre neurales (NSC) a baja densidad (50.000 células/cm2) en placas de cultivo de 6 pocillos con cubreobjetos de vidrio en 3 ml de medio de cultivo que consisten en la mezcla de medio / nutriente Eagle modifica....

Materials