Adaptación neuronal al preacondicionamiento hipóxico repetitivo en ratones

Resumen

Fuente: Poinsatte, K., et al., Cuantificación de la protección neurovascular después del preacondicionamiento hipóxico repetitivo y la oclusión transitoria de la arteria cerebral media en ratones. J. Vis. Exp. (2015)

Este video demuestra el método de preacondicionamiento hipóxico repetitivo (RHP) al exponer a un ratón a ciclos de hipoxia controlados antes de inducir un accidente cerebrovascular isquémico. El experimento evalúa sus efectos sobre la estabilidad de la barrera hematoencefálica, la adaptación neuronal y la inflamación.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Preacondicionamiento hipóxico repetitivo

1. Diseñe a medida cuatro caudalímetros en reguladores de gas y conéctelos a cámaras de inducción estándar de 15 L con tubos de cloruro de polivinilo (PVC) para permitir que el gas comprimido de los tanques de oxígeno (O₂) fluya hacia las cámaras a través de un puerto de entrada.
2. Divida a los ratones en 2 grupos: el grupo de preacondicionamiento hipóxico repetitivo (RHP), que recibe exposiciones al 8% y al 11% de O₂, y el grupo de control, que recibe exposiciones al 21% de O₂ (aire ambiente) al mismo tiempo.
3. Retire la tapa del filtro superior de cada jaula y coloque la jaula, con las botellas de comida y agua intactas, en las cámaras conectadas a sus respectivos tanques de O₂. Cierre y asegure la tapa de la cámara.
   1. Abra la válvula de gas principal de los tanques y ajuste el flujo inicial para cada cámara de inducción a 2 L por minuto (LPM) durante los primeros 5 minutos de exposición. Reduzca el caudal a 1 LPM durante el resto de la exposición.
   2. Al final de la exposición, reduzca el flujo a 0 LPM y cierre las válvulas de gas de los tanques.
   3. Abra las tapas de la cámara y vuelva a colocar la tapa superior del filtro en cada jaula. Coloque las jaulas en un alojamiento estándar hasta la próxima exposición hipóxica.
4. Rocíe cada cámara de inducción con NPD (Steris) o un desinfectante/desodorante equivalente después de cada uso.
5. Exponga ratones al 21% y RHP a la misma hora del día en el transcurso de dos semanas.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caudalímetros, reguladores	VetEquip, Inc	Pedido especial	Cuatro caudalímetros están conectados a un tubo de PVC flexible de 6,0 mm que se conecta al puerto de entrada de cada cámara de inducción con un conector hembra de plástico. Estos medidores de flujo están atornillados a una barra de metal de 6.5" x 1" x 1". Esta barra de metal está atornillada a un manómetro MI-246-P con una salida DISS. Este equipo de manómetro y caudalímetro se puede conectar a cada nuevo cilindro de gas con una llave.
Depósito de 21% de O₂	AirGas	OX USP200
Depósito de 11% de O₂ Depósito	AirGas	Depósito
especialidad de 8% de O₂	Pedido de especialidad	de AirGas
inducción de 15 L VetEquip		941454

de especialidad de Cámaras de