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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.
1. Imágenes de bioluminiscencia del crecimiento tumoral GL261
- Rocíe una cantidad generosa de desinfectante (solución de cloruro de dimetilamonio al 0,05%) en una toalla de papel limpia. Use la toalla de papel empapada en desinfectante para limpiar a fondo la sábana negra, los conos de la nariz y el divisor dentro de la cámara de imágenes donde los animales estarán en contacto con el dispositivo. Limpie bien todas las superficies con una toalla de papel limpia y seca. Repita esto una vez más y espere 5 min.
- Inicialice la estación de imágenes.
- Anestesiar al ratón con una mezcla de 300 μl que contenga 200 μl de ketamina/xilacina y 100 μl de luciferina (sal de potasio D-luciferina, 150 mg/kg) mediante inyección intraperitoneal.
- Espere 10 minutos después de la inyección y confirme si los ratones están completamente bajo anestesia pellizcando la cola. Para configurar el sistema de imágenes, seleccione "Luminiscente", "Tiempo de exposición automático" y agrupación "Medio". Coloque los ratones en la estación de imágenes y haga clic en el botón "Adquirir" para iniciar la imagen. Asegúrese de que el tiempo posterior a la inyección sea coherente con cada sesión de imágenes.
- Una vez adquirida la imagen con éxito, debería aparecer una ventana de imagen y una paleta de herramientas. Haga clic en la región de interés (ROI) o "Herramientas de ROI" y seleccione "automático" en el icono del círculo. Para definir el ROI, encierre en un círculo el área de la señal en la imagen y luego tome medidas del ROI como una unidad de fotones / seg / sr / cm2.
- Saque a los ratones de la cámara de imágenes y vigílelos hasta que se vuelvan ambulantes y conserven la actividad normal. Por lo general, el tiempo de recuperación es de aproximadamente 15 minutos. No devuelva a los ratones a la jaula con otros animales hasta que se recuperen por completo de la anestesia.
- Monitorear el crecimiento tumoral mediante imágenes de bioluminiscencia dos veces por semana hasta que los animales presenten los siguientes síntomas: pérdida de peso (pérdida de más del 20% en relación con el peso antes de la implantación), inapetencia (anorexia completa durante 24 horas) y falta de respuesta intencional sostenida a estímulos suaves (intento débil de levantarse), momento en el que deben ser sacrificados.
- Normalice los valores de luminiscencia para cada día con las lecturas correspondientes obtenidas el primer día de imágenes de bioluminiscencia (Figura 1A).
- Para el análisis estadístico, genere curvas de supervivencia utilizando el estimador de Kaplan-Meier y compare las diferencias entre las curvas de supervivencia utilizando una prueba de rango logarítmico.
