Imágenes tridimensionales de astrocitos inmunomarcados mediante microscopía confocal

Resumen

Fuente: Bagheri, M., et. al. Protocolo para el Análisis Morfométrico Confocal Tridimensional de Astrocitos. J. Vis. Exp. (2015).

Este video muestra la obtención de imágenes de astrocitos marcados con fluorescencia en una sección de cerebro de ratón utilizando un microscopio confocal. La sección del cerebro se coloca debajo de la lente del objetivo apropiado y se seleccionan los fluoróforos y filtros adecuados. Después de optimizar la exposición automáticamente, se definen los parámetros de escaneo para garantizar imágenes 2D de alta resolución. Se configuran los parámetros de pila Z y se adquieren imágenes 3D.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal correspondiente.

1. Animales, cirugía y preparaciones de muestras

NOTA: Prepare el tejido cerebral para el análisis microscópico confocal tridimensional (3D).

1. Divida a los animales al azar en dos grupos: beta amiloide (Aβ)_1-40\u2012inyección (n = 8) y Aβ_1-40\u2012inyección con tratamiento con genisteína (n = 8); administre genisteína (10 mg/kg diluidos en un vehículo como aceite de ricino polietoxilado) por sonda 1 hora antes de la cirugía.
2. Anestesiar a los animales con keta....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Amyloid beta 1-40	Sigma Aldrich	79793	Mantener a -70 °C
Genisteína	Sigma Aldrich	446-72-0	mantener a -20 °C
anticuerpos policolónicos de conejo contra la proteína ácida fibrilar glial	DAKO	Z0334
anticuerpo IgG anti-conejo anti-conejo conjugado con fosfato alcalino	DAKO
Cromógeno permanente líquido	DAKO	K0640
Tampón de sustrato rojo permanente líquido	DAKO	K0640
Cremophor EL	Sigma Aldrich	27963	Aceite de ricino polietoxilado - Paso 1.1
Microscopía de barrido láser confocal LSM 700	Carl Zeiss
imágenes 2000	Aparato estreotáxico óptico
	Tekno Stoelting

Volocity 6.3 Perkin Elmer Inc., Análisis de Graph pad Prism 5 Graph pad software Inc.