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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.
1. Nota de preparación de animales
: Los animales que van a sufrir lesiones leves requieren una adaptación a la oscuridad la noche anterior a la isquemia remota. Los animales que sufren daños leves requieren una cría oscura (12 horas de luz: ciclo oscuro, 5 lux)
- Realizar isquemia remota en roedores despiertos o anestesiados. Asegúrese de que los animales tengan un tono muscular saludable. Asegúrese de esto pellizcando la extremidad trasera superior para confirmar que hay suficiente músculo presente. La protección inducida por RIP contra lesiones leves se ha probado en ratas sedentarias de hasta 6 meses de edad.
- Preparación anestesiada para el preacondicionamiento isquémico remoto (RIP)
- Inyectar a ratas una inyección intraperitoneal de 60 mg/kg de ketamina y 5 mg/kg de xilacina. Verifique la profundidad de la anestesia extendiendo la pierna y pellizcando la piel en la parte inferior del pie. El animal no tiene reflejos si está profundamente anestesiado. Aplique lágrimas artificiales para evitar la sequedad de la córnea bajo anestesia.
- Coloque las ratas en una almohadilla térmica o en un tubo de calentador de agua circulante para mantener una temperatura corporal constante de 37,5 °C. Coloque a la rata en posición prona con las almohadillas de las patas de las extremidades inferiores hacia arriba. Tanto la extremidad derecha como la izquierda pueden sufrir isquemia remota.
2. Aplicación de la sonda de temperatura de
- la piel Extienda la pata de la rata que va a sufrir isquemia y coloque la sonda de piel en la almohadilla del pie. Coloque la sonda cutánea para maximizar el contacto entre la sonda de temperatura y la piel. Empuje firmemente la sonda en la almohadilla para los pies y fije la sonda con cinta de papel.
- Verifique la colocación de la sonda cutánea rastreando la temperatura en el software de registro de temperatura. Asegúrese de que la temperatura de la piel esté entre 30 y 34 °C y se mantenga estable. Realice un seguimiento de la temperatura de la piel durante 1-2 minutos. Ajuste la sonda cutánea si la temperatura es inestable o inferior a 30 °C.
3. Isquemia remota
- Desinfle el manguito y asegúrese de que la válvula de presión de aire esté cerrada. Extienda la pierna y rodee sin apretar el brazalete en la extremidad trasera superior. Use el dedo índice y el pulgar para extender la pierna y los dedos inferiores para mantener el puño suelto en su posición.
- Aumente la presión del manguito del animal anestesiado a 160 mmHg y, en animales despiertos, aumente la presión del manguito a 180 mmHg.
Nota: La presión arterial anestesiada de las ratas oscila entre 120 y 140 mmHg y aumenta a 160 mmHg cuando están conscientes. Comience el temporizador y los registros de temperatura de los pies una vez que se alcance la presión correcta.
Nota: La temperatura de los pies debe bajar 2 °C después de 5 minutos de presión constante. - Mantenga la posición del manguito por encima de la "rodilla" del animal durante toda la isquemia. La presión del manguito comenzará a disminuir después de unos minutos o si la extremidad de la rata se mueve.
- Bombee repetidamente la bombilla de inflado en ráfagas cortas para mantener la presión deseada ráfagas cortas repetitivas de bombeo
La - isquemia remota se puede administrar continuamente durante entre 5 y 15 minutos. El protocolo de reperfusión de isquemia incluye 2 períodos de isquemia de 5 minutos con una reperfusión intermedia de 5 minutos.
- Desinfle la presión del manguito aflojando la válvula de presión de aire. Verifique el cambio de temperatura en el transcurso del protocolo de isquemia. Suelte el brazalete.
- Continúe con la experimentación con lesiones. Los animales bajo el efecto de la anestesia deberán colocarse en una almohadilla térmica. Continúe monitoreando a los animales hasta el deambulatorio. Los animales no pueden ser devueltos a la vivienda hasta que caminen.