Formulación de un sistema portador de exosomas cargado de dopamina

Resumen

Fuente: Yavuz, B., et al. Formulación y caracterización de un sistema portador de dopamina basado en exosomas. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra la formulación de exosomas cargados de dopamina, centrándose en la permeabilización de la membrana inducida por saponina para mejorar la encapsulación de dopamina dentro de los exosomas.

Protocolo

1. Carga de dopamina en exosomas

NOTA: Una vez completada la caracterización de los exosomas de células madre mesenquimales de gelatina de Wharton (WJ-MSC), se obtuvieron exosomas cargados de dopamina como sistema de administración de fármacos. La carga del fármaco en los exosomas se realiza mediante el método de incubación.

1. Agregue 3 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a la suspensión del exosoma. Esterilice la suspensión diluida por filtración utilizando filtros de 0,22 μm. Transfiera 500 μL de la suspensión de exosomas esterilizada a otro tubo.
2. Prepare la solución de dopamina (0,5 mg/ml) con agua destilada. Agregue 500 μL de solución de dopamina en los tubos que contienen los exosomas.
3. Agregue saponina a la suspensión en el paso 1.2. Incubar la suspensión de exosoma y dopamina preparada durante 24 h a 37 °C. NOTA: La concentración de saponina no debe exceder el 0,002% de la solución total.
4. Ultracentrifugar la suspensión a 90.000 × g durante 70 min para eliminar la dopamina y la saponina libres del medio. Almacene los exosomas aislados a -20 °C hasta su uso para un análisis más detallado. nota: Agregue ácido ascórbico al 0,02% para la estabilidad de la solución de dopamina preparada.

Materiales