Formulación de un sistema portador de exosomas cargado de dopamina

Resumen

Fuente: Yavuz, B., et al. Formulación y caracterización de un sistema portador de dopamina basado en exosomas. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra la formulación de exosomas cargados de dopamina, centrándose en la permeabilización de la membrana inducida por saponina para mejorar la encapsulación de dopamina dentro de los exosomas.

Protocolo

1. Carga de dopamina en exosomas

NOTA: Una vez completada la caracterización de los exosomas de células madre mesenquimales de gelatina de Wharton (WJ-MSC), se obtuvieron exosomas cargados de dopamina como sistema de administración de fármacos. La carga del fármaco en los exosomas se realiza mediante el método de incubación.

1. Agregue 3 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a la suspensión del exosoma. Esterilice la suspensión diluida por filtración utilizando filtros de 0,22 μm. Transfiera 500 μL de la suspensión de exosomas esterilizada a otro tubo.
2. Prepare la solución de dopamina (0,5 mg/ml) con agua destilada. Agregue 500 μL de solución de dopamina en los tubos que contienen los exosomas.
3. Agregue saponina a la suspensión en el paso 1.2. Incubar la suspensión de exosoma y dopamina preparada durante 24 h a 37 °C. NOTA: La concentración de saponina no debe exceder el 0,002% de la solución total.
4. Ultracentrifugar la suspensión a 90.000 × g durante 70 min para eliminar la dopamina y la saponina libres del medio. Almacene los exosomas aislados a -20 °C hasta su uso para un análisis más detallado. nota: Agregue ácido ascórbico al 0,02% para la estabilidad de la solución de dopamina preparada.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0,22 μm filtro	de membrana Aisimo		Se utiliza para el proceso de esterilización
Tubo Falcon de 15 ml	Nido		Se utiliza en el paso de cultivo celular
Tubo Falcon de 50 ml	Nido		Se utiliza en la célula paso
de cultivo Centrífuga	Hitachi	CF16RN	Utilizado en el paso de aislamiento de exosomas
Clorhidrato de dopamina H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Utilizado en la carga de dopamina de exosomas
Ultracentrífuga Optima XPN-100	Beckman Coulter		Utilizado en el paso de aislamiento de exosomas
Tableta de PBS	Biomatik	43602	En la preparación de la solución de PBS
Saponina	Sigma	47036-50G-F	Se utilizó añadiéndola a la solución total en el proceso de carga de dopamina del exosoma.
Células madre mesenquimales de gelatina de Wharton	ATCC