Inducción optogenética de depresión a largo plazo para suprimir el comportamiento de búsqueda de narcóticos en ratas

Resumen

Fuente: Rich, M. T., et al. Uso de la optogenética para revertir la neuroplasticidad e inhibir la búsqueda de cocaína en ratas. J. Vis. Exp. (2021)

Este video demuestra el uso de la optogenética para inducir depresión a largo plazo (LTD) en el núcleo geniculado medial a las sinapsis de la amígdala lateral (MGN-LA), debilitando el comportamiento de búsqueda de narcóticos inducido por señales en un modelo de rata. La rata, implantada quirúrgicamente con fibras ópticas y transducida viralmente para expresar canales iónicos sensibles a la luz, se somete a estimulación optogenética con pulsos ópticos de baja frecuencia, lo que desencadena la liberación de neurotransmisores y el debilitamiento sináptico. Este proceso reduce la transmisión sináptica de MGN-LA a través de la internalización del receptor de neurotransmisores, lo que finalmente interrumpe la asociación entre las señales y el comportamiento de búsqueda de drogas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Cateterismo intravenoso de roedores, administración de virus e implantación de fibra óptica

1. Prepare a los animales para la cirugía.
   1. Anestesiar completamente a las ratas con el anestésico de su elección según las pautas institucionales. Una opción es el clorhidrato de ketamina (87,5-100 mg/kg, intramuscular [i.m.]) y el clorhidrato de xilacina (5 mg/kg, i.m.). Asegúrese de que la rata esté completamente anestesiada verificando la falta de un reflej....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0.9% Saline	Fisher Scientific	NC0291799
A.M.P.I. Stimulus	Iso-Flex
AAV5.hSyn.oChIEF.tdTomato	Duke Viral Vector Core (a través de Roger Tsien)	#268
AAV5.hSyn.tdTomate (Control)	Duke Viral Vector Core Control
Lágrimas artificiales (ungüento oftalmológico)	Covetrus	70349
Betadine	Butler Schein	38250
Cocaína HCl	NIDA Drug Supply Center	9041-001
Controlador de temperatura de doble canal	Warner Instruments	TC-344C
Etanol	Universidad de Pittsburgh Química Almacén	200C5000
Tapas de polvo de férula	Labs	CAPL	Tapas de polvo de plástico blanco para casquillos de 1.25 mm
Mangas de acoplamiento de férulas	Lentes dóricas	F210-3011	Sleeve_BR_1.25, Bronce, 1.25 mm
ID Virolas	Productos de fibra de precisión	MM-FER2007C-2300	Ø1,25 mm Férula cerámica multimodo LC/PC, tamaño de orificio de Ø230 μm
Fibra óptica	Thor Labs	FP200URT	fibra multimodo con núcleo de 200 μm (0,5 NA)
Junta rotativa de fibra óptica	Prizmatix	(Pedido en Amazon)	Conector FC-FC de 18 mm de diámetro para fibra
Herramienta de pelado de fibra	Thor Labs	T12S21
Gentamicina	Henry Schein	6913
Jeringa Hamilton	Hamilton	80085	10 μL volumen, calibre 26, 2 pulgadas, estilo de punto 3
Pistola de calor	Allied Electronics	972-6966	250 V, 750-800 °F
Epoxy curable por calor	Productos de fibra de precisión	PFP-353ND-8OZ
Heparina	Henry Schein	55737
Ácido clorhídrico	Fisher Scientific
Ketamina HCl	Henry Schein	55853	La ketamina es una sustancia controlada y debe manipularse de acuerdo con las pautas institucionales
Henry Schein	9846		Lactate Ringer
, controlador y acoplador de láser a fibra	Sistemas láser OEM	BL-473-00100-CWM-SD-xx-LED-0	Láser de estado sólido bombeado por diodo de 100 mW, 473 nm (una opción)
Lidocaine	Butler Schein	14583
	Thor Labs	PM100D	Consola compacta de medidor de energía con pantalla digital
Adhesivo instantáneo Loctite	Grainger	5.00E+207
	Molecular Devices	MULTICLAMP700B / Digidata 1440A
Bomba de microinyector	Harvard Apparatus	70-4501	Micromanipulador de jeringa doble
	Sutter Instruments	MPC-200/ROE-200
Orthojet cemento dental, líquido	Lang Dental	1504BLK	negro
Orthojet cemento dental, polvo	Lang Dental	1530BLK	Contemporary powder, negro
Cables de conexión	Thor Labs	FP200ERT	Multimodo, FT030 Tubería
Rimadyl (Carprofeno)	Henry Schein	24751
Cámaras de autoadministración/Software	Med Associates	MED-NP5L-D1
Tornillos de máquina de acero inoxidable	WW Grainger	6GB25	M2-0.40mm Tornillo de máquina, Pan, Phillips, A2 Acero inoxidable, Liso, 3 mm de longitud
Adaptador estereotáxico para férulas	Thor Labs	XCL
Stereotaxic Frame	Stoelting	51603
	Herramientas de ciencia fina	18020-50	Hilo de seda; Tamaño: 5/0, Diámetro: 0.12 mm
Adhesivo tisular Vetbond	Covetrus	1505

Thor 219405490Láser deSensor de luz Amplificador de microelectrodos/adquisición de datos Hilo de sutura