Imágenes de tejido profundo del cerebro de un pez cebra utilizando un microscopio de fluorescencia de tres fotones

Resumen

Fuente: Hontani, Y., et al. Microscopía de fluorescencia de tres fotones de tejido profundo en cerebro intacto de ratón y pez cebra. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra la configuración y ejecución de imágenes de tres fotones en un cerebro de pez cebra anestesiado. El protocolo permite la visualización de tejido profundo de neuronas marcadas con fluorescencia, revelando la actividad y las estructuras neuronales en tiempo real para aplicaciones de investigación en neurociencia.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Imágenes intravitales en el cerebro del pez cebra
   NOTA: Para ubicar correctamente el cerebro del pez debajo de la lente del objetivo, se utiliza una cámara de dispositivo de carga acoplada secundaria (CCD) en el mismo camino que la luz de excitación para imágenes de campo amplio.
   
   1. Configure el microscopio y calibre la potencia.
   2. Coloque un objetivo de bajo aumento (generalmente 4x) en el microscopio.
   3. Coloque la placa de Petri que ....

Resultados

Figura 1: Capturas de pantalla representativas para imágenes intravitales en peces (sección 1 del protocolo).) Vista en modo de cámara del software de adquisición de imágenes con la lente del objetivo 4x en su lugar. Las car.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
5% Povidona yodada	Amazon	NDC 67818-155-32	Limpieza aceptical de áreas quirúrgicas
70% Etanol	Thermo Fisher Scientific	CAS 64-17-5	Limpieza aceptical de áreas quirúrgicas
Agarose	Sigma	A4718-256	Preparación de la cámara de pez cebra
Bérgamo II	Thorlabs		Microscopio de imagen multifotónica
Bupivacaína	Cornell Veterinary Care
GaAsP Amplified PMT	Thorlabs	PMT2100	Detector PMT
Calentador (800 W)	Calentador de acuario Finnex		para agua de pez cebra)
Kimwipes	Kimtech		Tejido de laboratorio para la preparación del pez cebra
Jeringa Nanofil (10 micrómetros) con aguja de 36 G	WPI	NANOFIL + NF36BV	Jeringa y aguja para inyección de bromuro de pancuronio
Bomba peristáltica	Elemental Science	ESI MP2	Bomba de agua para ajuste de pez cebra
Tubo de polietileno (D.I. 0,58 mm., D.E. 0,965 mm.)	Tubería de bomba MP2	Ciencia Elemental	Tubería que va en la boca del pez cebra
SR400	Stanford Research Systems	SR400	Contador de fotones
Sensor de potencia de fotodiodo estándar Thorlabs		S122C	Detector de potencia
Cera de caja de tiras delgadas	Corning Rubber Co., Inc.		Mantener el tubo en su lugar en la cámara del pez cebra
ThorImage	Thorlabs Software de adquisición de		imágenes
Tricaína (sal de metanosulfonato de etil-m-aminobenzoato)	MP	103106	Anestesia y eutanasia
Tubo Tygon (diámetro interior 1/16 pulg., diámetro exterior 1/8 pulg.)	Tubo Tygon		para flujo de agua para preparación de pez cebra
VaporGuard	VetEquip	931401	Para reciclar isoflurano
Adhesivo tisular Vetbond	3M	1469SB	Para pegar la ventana de vidrio en el cráneo del ratón y pegar el tejido de laboratorio al preparar el pescado.
XLPLN25XWMP2	Objetivo dedicado a la excitación multifotónica	Olympus

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