Evaluación de los efectos neuroprotectores de un compuesto de prueba en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media

Resumen

Fuente: Lee, S. E., et al. Evaluación de los efectos neuroprotectores del extracto de Glycyrrhizae radix et rhizoma utilizando un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria cerebral media. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra el procedimiento para evaluar el efecto neuroprotector de un compuesto de prueba en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media. El compuesto ingresa al cerebro, previene la muerte neuronal y reduce el volumen del infarto, lo que confirma su efecto neuroprotector en comparación con un ratón no tratado.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO)

1. Utilice ratones machos C57BL/6 de 6 semanas de edad y con un peso de 22-25 g. Proporcione a todos los animales acceso gratuito a comida y agua estándar, y alójelos en un entorno con temperatura controlada (22 ±1 °C) y un ciclo de luz/oscuridad de 12 h.
   1. Divida los ratones en grupos de seis ratones cada uno, que deben consistir en grupos de tratamiento normal operado simuladamente, control y Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
   2. Realice la cirugía MCAO en los grupos de control y tratamiento GRex utilizando un microscopio estereoscópico.
2. Induzca anestesia por inhalación en los ratones usando isoflurano al 2% en óxido nitroso (N₂O) al 70% y oxígeno al 30% (O₂). La anestesia se considera suficiente cuando el ratón deja de responder a un estímulo mecánico aplicado a su cola. Mantenga la temperatura corporal de los ratones a 36,5 ± 0,5 °C utilizando una manta de retención de la temperatura corporal conectada a un termómetro.
3. Elimine todo el vello del pecho y el cuello de los ratones afeitándolos, seguido del uso de crema depilatoria. Desinfecte el sitio quirúrgico de la piel con un exfoliante de betadine alternando con alcohol dos veces, y luego haga una incisión de aproximadamente 2 cm de largo con una cuchilla quirúrgica en el centro del cuello. Aísle cuidadosamente la arteria carótida común izquierda (ACCP), la arteria carótida externa y la rama de la arteria carótida interna de los tejidos conectivos circundantes.
4. Ligue la arteria carótida externa y la arteria carótida común con una sutura quirúrgica (sutura de seda 4-0, medio nudo) para bloquear temporalmente el flujo sanguíneo hacia la arteria carótida interna durante la operación.
5. Inserte una sutura de nailon recubierta de silicona (monofilamento 8-0, 11 mm de largo) a través de la arteria carótida interna hasta el origen de la ACM izquierda. Ajuste el grosor de la parte recubierta de silicona del filamento a un rango de 0,10-0,12 mm.
6. Mida la disminución del flujo sanguíneo cerebral relativo (rCBF) en el MCA utilizando un caudalímetro láser Doppler. El MCAO se confirmará cuando el rCBF se mantenga en < 20% de los valores de la condición de reposo durante todo el período isquémico.
7. Fije el filamento insertado al vaso sanguíneo durante 2 h mientras la arteria cerebral está ocluida, y luego retire con cuidado el filamento para restaurar el flujo sanguíneo durante 22 h de reperfusión. Sutura la piel cosiendo en cinco lugares (3-0 sutura de seda, dos nudos de medio enganche) y deja que cada ratón se despierte de la anestesia.

Materiales