Imágenes de la migración de células tumorales en tejido de glioblastoma mediante microscopía confocal de barrido de lapso de tiempo

Resumen

Fuente: Parker, J. J., et al. Un modelo de cultivo de corte organotípico de glioblastoma humano para el estudio de la migración de células tumorales y los efectos específicos del paciente de los fármacos antiinvasivos. J. Vis. Exp. (2017)

Este video muestra las imágenes de cortes de tejido de glioblastoma que expresan proteína verde fluorescente (GFP) a través de microscopía confocal. Las imágenes de alta resolución se capturan a intervalos constantes para rastrear el movimiento y la dirección de las células tumorales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las pautas del IRB del instituto.

1. Etiquetado de células tumorales a través de retrovirus que expresan proteína fluorescente verde

NOTA: La microscopía de lapso de tiempo para el análisis de la migración de células tumorales requiere un etiquetado fluorescente estable y a largo plazo de las células dentro del cultivo de corte. Se sugiere el uso de retrovirus porque infecta selectivamente las células en división, enriqueciendo así el etiquetado fluorescente dentro de la población de células tumorales en ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM High Glucose	Invitrogen (Gibco)	11960-044
Neurobasal-A Medium, menos rojo de fenol	Invitrogen (Gibco)	12349-015
B-27 Supplement (50X),	Invitrogen (Gibco)	17504-044
Penicilina-Estreptomicina (10,000 U/mL)	Invitrogen (Gibco)	15140-122
Suplemento GlutaMAX	Invitrogen (Gibco)	35050-061
L-Glutamina (200 mM)	Invitrogen (Gibco)	25030-081
HEPES (1 M)	Invitrogen (Gibco)	15630-080
Nistatina Suspensión	Sigma-Aldrich	N1638-20ML	10.000 unidades/ml en DPBS, procesado asépticamente, BioReactivo, adecuado para cultivo celular
UltraPure Low Melting Point Agarose	Invitrogen (Gibco)	16520-050	Se funde a 65,5 C, permanece fluido a 37 C y se fija rápidamente por debajo de 25 C.
Isolectina GS-IB4 de Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 Conjugado	Thermo Fisher (Sondas moleculares)	I32450	Utilizado en medios para marcar Microglía/Macrófagos
pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector	Clonetech	632520
Concentrador Retro-X	Clonetech	31455	Resina aglutinante para la concentración sin ultracentrifugación de sobrenadantes virales
pVSG-G Vector	Clonetech	631530	parte del sistema de expresión retroviral universal Retro-X
GP2-293 Células de empaquetado viral	Clonetech	631530	parte del sistema de expresión retroviral universal Retro-X
Pegamento de cianoacrilato (Super Glue)	Sigma-Aldrich	Z105899
Molde de inclusión Peel-A-Way de viscosidad media (cuadrado - S22)	Polysciences, Inc.	18646A-1	Moldes para incrustación de muestras tumorales
Micro Espátulas de acero inoxidable	Fisher Scientific	S50823	Dobla el instrumento 45 grados en el cuello de la hoja de la cuchara
Pinzas curvadas de punta fina para disección Fisherbrand	Scientific	08-875
Cuchilla de afeitar de un solo filo (Maquinillas de afeitar de seguridad americanas)	Fisher Scientific	17-989-001	El borde de la hoja es de 0.009" de grosor. La cubierta de borde romo ondulado se retira antes de cargarla en el vibratomo.
Leica VT1000 S Vibratomo	Leica Biosystems	VT1000 S
Inserto de cultivo celular de PTFE hidrófilo	EMD Millipore	PICM0RG50	30 mm, PTFE hidrófilo, tamaño de poro de 0,4 μm
35 mm Platos con fondo de vidrio	MatTek	P35G-1.5-20-C Manga	20 mm de diámetro de vidrio. Espesor del vidrio del cubreobjetos 1.5
LSM 510 Micoscopio confocal	Zeiss	LSM 510	10x Objetivo de aire (c-apocromático NA 0.45)
Incubadora PECON Stagetop	PeCON Alemania	(Descontinuado)	La incubadora PM 2000 RBT es un producto comprable diseñado para su uso con microscopios Zeiss.

sin sérico Fisher de