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Desarrollo de una red neuronal de ingeniería de microtejidos utilizando una microcolumna basada en hidrogel

August 7th, 2025

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Abstract

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Fuente: Struzyna, L. A. et. al., Redes neuronales de ingeniería de microtejidos tridimensionales inspiradas en anatómicas para la reconstrucción, modulación y modelado del sistema nervioso. J. Vis. Exp. (2017)

Este video demuestra el desarrollo de redes neuronales de ingeniería de microtejidos utilizando una microcolumna de hidrogel con un núcleo de matriz extracelular. Los agregados neuronales sembrados se adhieren, extienden las proyecciones y forman redes neuronales estructuradas, lo que contribuye a los avances en el neurodesarrollo y la investigación neuroterapéutica.

Protocol

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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Desarrollo del hidrogel de agarosa (componente acelular de redes neuronales de ingeniería de microtejidos (micro-TENN))Preparación de la

  1. solución de agarosa
    1. Dentro de un gabinete de bioseguridad, prepare los depósitos para las microcolumnas transfiriendo 20 ml de solución salina tamponada con fosfato (DPBS) de Dulbecco a cada una de las dos placas de Petri de 10 cm. Esterilice las pinzas finas y los microbisturíes con un esterilizador de perlas c....

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Results

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Figura 1: Planos del dispositivo de fabricación de microcolumnas cortado con láser y el molde de micropocillos piramidales impreso en 3D para la agregación celular. (A)-(B) Plano e imagen de las mitades inferior y superior de la matriz de canales cilíndri.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Laser cutterSistemas láser universalesPLS4.75Se utiliza para fabricar el molde de microcanales cortado con láser.
Dispositivo de fabricación de microcolumnas cortado con láserHecho a medida--------------Póngase en contacto con nuestro grupo de investigación si está interesado. Dimensiones y planos proporcionados en el manuscrito.
Tornillos----------------------------#4-40 con un diámetro de rosca de 3,05 mm
Tuercas----------------------------#4-40 con un diámetro de rosca de 3,05 mm
Aguja de acupuntura (180 μm de diámetro)Lhasa medicalsj.16X40El diámetro puede variar según el tamaño deseado para el lumen de la microcolumna.
Placa de PetriFisher08772B
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS)Invitrogen
Fisher13-678-11D
AgaroseSigmaA9539-50G
Tubo capilar (398 μm de diámetro)Fisher21170DEl diámetro puede variar según el tamaño deseado para la carcasa de la microcolumna.
Placa calefactoraFisherSP88857200
Barra magnéticaFisher1451352
MicropipetaSigmaZ683884-1EA Aguja
calibre 25 mmFisher14-826-49
MicrobisturíRoboz quirúrgicaRS-6270
Tijerasde cienciafina14081-09
FórcepsWorld instrumentos de precisión 501985
Esterilizador de perlas calientesEstereoscopio SigmaZ378550-1EA
NikonSMZ800N Se utiliza para todos los pasos de disección y para la fabricación de micro-TINN.
Cola de rata tipo I colágenoCorning354236Mantener a 4 ºC y retirar solo cuando sea necesario. Use hielo para preservar su temperatura cuando esté en uso.
Tubo de microcentrífugaFisher02-681-256
Laminina de ratónCorning354232Mantener a 4 ºC y retirar solo cuando sea necesario. Use hielo para preservar su temperatura cuando esté en uso.
Medio neurobasalInvitrogen21103049Medio basal para el cultivo de células neuronales prenatales y embrionarias. Conservar a 4ºC y calentar a 37 ºC antes de usar.
Hidróxido de sodio (NaOH)FisherSS2661
Ácido clorhídrico (HCl)FisherSA48-1
Papel tornasolFisher09-876-18
Solución salina equilibrada de Hank (HBSS)Invitrogen14170112Almacenar a 4 ºC.
Tripsina-EDTAInvitrogenalconservar a -20 ºC y calentar a 37 ºC antes de su uso.
Desoxirribonucleasa pancreática bovina (DNasa) ISigma10104159001Almacenar a -20 ºC y calentar a 37 ºC antes de su uso.
Suplemento B-27Invitrogen12587010Suplemento añadido al medio neurobasal para el cultivo de neuronas hipocampales y corticales. Conservar a -20 ºC y calentar a 37 ºC antes de su uso.
L-glutaminaInvitrogen35050061Conservar a -20 ºC y calentar a 37 ºC antes de su uso.
Sprague Dawley día embrionario 18 ratasCharles RiverCepa 001
Pipeta PasteurFisher22-042816
Tubo de centrífuga de 15 mlEMESCO1194-352099
VortexFisher02-215-414
CentrífugaFisher05-413-115
HemocitómetroFisher02-671-6
Objet30 Impresora 3DStratasys--------------Se utiliza para fabricar los moldes de micropozos piramidales.
Molde de pozo piramidal impreso en 3DHecho a medida--------------Póngase en contacto con nuestro grupo de investigación si está interesado. Dimensiones y planos proporcionados en el manuscrito.
Polidimetilsiloxano (PDMS) y agente de curadoFisherNC9285739Viene como kit con elastómero y agente de curado. Úselo dentro de una campana extractora de productos químicos.
EmbudoFisher10-348C
1 ml de bulbo de pipetaSigmaZ509035
MicroespátulaFisherS50821
Placa de cultivo de 12 pocillosEMESCO1194-353043
HornoFisher11-475-154
IncubadoraFisher13 998 076
Microscopio Eclipse Ti-SNikon--------------Se utiliza para tomar las imágenes de contraste de fase. Con adquisición de imágenes digitales mediante una cámara QiClick interconectada con el software de investigación básica Nikon elements (4.10.01).
Pipeta serológica desechable de poliestireno 14200075 Herramientas 0,25% 25200056

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