Protocolos para la inoculación dentro de la vagina y toma de muestras en el modelo experimental de ratón de Candida Vaginitis

Resumen

Las principales técnicas que se utilizarán en la evaluación de Candida en un modelo animal experimental se describen. Los métodos permitirá una rápida recolección de muestras vaginales y los linfocitos de los ganglios de drenaje linfático lumbar. Estas técnicas pueden dar lugar a modelos de ratón de otras enfermedades en el tracto genital inferior femenino.

Resumen

Candidiasis vulvovaginal (CVV), causada por especies de Candida, es una infección micótica de la parte baja del tracto genital femenino que afecta a aproximadamente el 75% de las mujeres sanas durante sus años reproductivos ^18,32-34. Los factores predisponentes son el uso de antibióticos, diabetes no controlada y la alteración en los niveles hormonales reproductivos debido al embarazo, anticonceptivos orales o terapia de reemplazo hormonal ^33,34. VVC recurrente (RVVC), definida como tres o más episodios por año, afecta a un independiente de 5 a 8% de las mujeres sin factores predisponentes ^33.

Un modelo experimental de ratón de la CVV se ha establecido y utilizado para estudiar la patogenia y la respuesta del huésped a la mucosa Candida ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37.} Este modelo también se ha empleado para evaluar el potencial terapias antifúngicas in vivo ^13,24. El modelo requiere que los animales se mantienen en un estado de pseudoestrus para optarIMAL colonización por Candida / infección ^6,14,23. Bajo tales condiciones, los animales inoculados se han detectable carga fúngica vaginal durante semanas o meses. Estudios anteriores muestran un paralelo muy alta entre el modelo animal y la infección humana con respecto a las propiedades inmunológicas y fisiológicas ^3,16,21. Las diferencias, sin embargo, son la falta de Candida en la flora vaginal normal y un pH neutro vaginal en los ratones.

Este sentido, demuestran una serie de métodos clave en el modelo de ratón que incluyen vaginitis inoculación vaginal, rápida recolección de muestras vaginales, evaluación de la carga de hongos vaginales, y los preparativos para la extracción de tejido celular / aislamiento. Esto es seguido por resultados representativos para los componentes del flujo vaginal lavado, la carga de hongos, y el drenaje de los rendimientos de los ganglios linfáticos de leucocitos. Con el uso de anestésicos, las muestras de lavado se pueden recoger en múltiples puntos de tiempo en los mismos ratones para la evaluación longitudinal de lainfección / colonización. Además, este modelo no requiere de agentes inmunosupresores para iniciar la infección, lo que los estudios inmunológicos en condiciones de host definidos. Finalmente, el modelo y técnica de cada uno introducido aquí podría dar lugar al uso de las metodologías para examinar otras enfermedades infecciosas del tracto genital femenino (bacterianas, parasitarias, virales) y las respectivas defensas locales o sistémicas.

Protocolo

1. Inoculación vaginal por Candida albicans

1. Tres días antes de la inoculación, mientras que la restricción de los animales para exponer el abdomen, se inyectan 100 l de aceite de sésamo contiene 0,1-0,5 mg de β-estradiol por vía subcutánea en el abdomen inferior. Introduzca la aguja de 5 a 10 mm lateral a la piel para minimizar la fuga del sitio de inyección.
   La administración subcutánea de estrógenos en la parte inferior del abdomen es óptimo en este modelo debido a la proximidad a la zona genital. Las dosis efectivas pueden variar según las cepas de ratón, las edades o los derivados de los estrógenos. En estudios previos utilizando CBA-J

Discusión

Un modelo experimental de ratón de la vaginitis por Candida se ha establecido y utilizado históricamente para las últimas décadas para estudiar la respuesta del huésped a la mucosa Candida, así como para las pruebas de terapias antifúngicas ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} Los protocolos que aquí se presenta incorpora eficientes y los métodos menos mano de obra, y parece ser uno de los sistemas modelo más optimizada de Candida vaginitis descrito hasta la fecha. Estas técnicas permit.......

Materiales

Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Mujer CBA / J ratones	Charles River Laboratories	01C38	5-6 semanas de edad
Candida albicans (3153A)	Colección Nacional de hongos patógenos, Reino Unido	NCPF3153
Aceite de sésamo	Sigma-Aldrich	S3547	No tiene que ser pre-esterilizados antes de su uso
Β-estradiol 17-valerato	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5mg en aceite de sésamo
Phytone peptona	Becton Dickinson	211906	Suplemento con glucosa al 0,1%
Solución de azul tripano	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud dextrosa agar	Becton Dickinson	211584
Colagenasa tipo IV	Sigma-Aldrich	C5138	0,25%
Dispasa	Invitrogen	17105-041	1,7 U / ml
Pantallas de malla de alambre	TWP	060X060S0065W36T	N º 60 de malla, de acero
Solución salina equilibrada de Hanks	Invitrogen	24020-117
CytoPrep fijador	Fisher Scientific	12-570-10	Conserva diapositivas frotis
Papanicolaou EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Tinción de Papanicolaou OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Hematoxilina de Harris Alum	EMD Chemicals	638A-85
Isoflurano	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Se utiliza con vaporizador isoflurano o en un sistema cerrado anestésico cámara baja