Murino linfáticos superficiales Cirugía de los ganglios

Summary

Para seguir la progresión de una respuesta inmune con el tiempo dentro del mismo ratón, los ganglios linfáticos se pueden extirpar mediante cirugía secuencial. Aquí se describe cómo esta técnica se puede realizar.

Abstract

En el campo de la inmunología, para entender la progresión de una respuesta inmune contra una vacuna, una infección o un tumor, la respuesta es seguido a menudo con el tiempo. Del mismo modo, el estudio de la homeostasis de los linfocitos se requieren experimentos en curso. Realizar estos estudios dentro del mismo ratón es ideal para reducir la variabilidad experimental, así como el número de ratones utilizados. La extracción de sangre permite un rendimiento de experimentos de tiempo, pero sólo se da información sobre los linfocitos circulantes y proporciona un número limitado de células ^1-4. Dado que los linfocitos que circulan por el cuerpo y que residen en los ganglios linfáticos tienen propiedades diferentes, es importante examinar ambas localidades. La eliminación secuencial de los ganglios linfáticos mediante cirugía ofrece una oportunidad única para seguir una respuesta inmune o la expansión de células inmunes en el mismo ratón a través del tiempo. Además, esta técnica produce entre 1-2x10 ⁶ células por ganglio linfático que es suficiente para PErform caracterización fenotípica y / o ensayos funcionales. La cirugía secuencial de los ganglios linfáticos o linfadenectomía ha sido utilizado con éxito por nosotros y otros ^5-11. Aquí se describe cómo los nódulos linfáticos inguinales braquial y se puede quitar haciendo una pequeña incisión en la piel de un ratón anestesiados. Dado que la cirugía es superficial y se hace rápidamente, el ratón se recupera muy rápidamente, cura bien y no experimenta dolor excesivo. Cada segundo día, es posible cosechar uno o dos ganglios linfáticos permitiendo experimentos de tiempo. Esta técnica es por tanto adecuado para estudiar las características de los ganglios linfáticos de linfocitos que residen en el tiempo. Este enfoque es adecuado para diferentes diseños experimentales y creemos que muchos laboratorios se beneficiarán de la realización de cirugías secuenciales de los ganglios linfáticos.

Protocol

1. Preparación Antes de la cirugía

Los ratones fueron tratados de acuerdo con el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales Directrices.

1. Ratones anestesiar por inyección de ketamina / xilazina (150/300 mg / kg, ip) o por inhalación de isoflurano (2%, oxígeno 1L). Si está disponible, isoflurano se debe utilizar, ya que permite un mejor control de tiempo de anestesia y profundidad. Además, el oxígeno se administra al mismo tiempo que soporta las funciones fisiológicas de los animales. Además, isoflurano está directamente eliminado por los pulmones y por lo tanto no requiere metabolismo hepático o renal.
2. Inyectar buprenor....

Discussion

Hemos descrito un protocolo de cirugía LN que puede aplicarse a muchos sistemas experimentales. Aunque es muy útil para seguir la respuesta inmune o la homeostasis de las células inmunitarias, esta técnica tiene algunas limitaciones. En primer lugar, sólo cuatro LN pueden ser cosechadas. En segundo lugar, estudió la respuesta inmune debe ser sistémica u ocurre en las inguinales superficiales o braquial (piel de drenaje) LNS. Finalmente, el número de células recolectadas se ve influida por la calidad de la eliminación LN.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reactivo Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Graefe Bellas Pinzas de primera calidad de patrón	Aparato de Harvard	52-2144	Fuertemente curvado, de 10 cm (4 pulgadas), 0,8 mm de la punta
Clip Michel Aplicar y eliminar Pinzas	Aparato de Harvard	52-3779	12,5 cm (5 pulgadas)
Michel Clip 100	Aparato de Harvard	52-3746	7,5-1,75 mm
Temgesic (hidrocloruro de buprenorfina)	Schering-Plough
Vetalar (clorhidrato de ketamina)	Boniche de Salud Animal		DIN: 01989529
Rompun (xilazina)	Bayer		DIN: 02169592
El isoflurano	ABBOTT		DIN: 02032384
Hypotears pomada para los ojos	Novartis Ophtalmics		DIN: 02133288
Baxedin (gluconato de clorhexidina al 2% en alcohol isopropílico al 70%)	Omega	L0000017	DIN: 02251477