Para seguir la progresión de una respuesta inmune con el tiempo dentro del mismo ratón, los ganglios linfáticos se pueden extirpar mediante cirugía secuencial. Aquí se describe cómo esta técnica se puede realizar.
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Artículo de método
Murino linfáticos superficiales Cirugía de los ganglios
En este artículo
Resumen
Resumen
En el campo de la inmunología, para entender la progresión de una respuesta inmune contra una vacuna, una infección o un tumor, la respuesta es seguido a menudo con el tiempo. Del mismo modo, el estudio de la homeostasis de los linfocitos se requieren experimentos en curso. Realizar estos estudios dentro del mismo ratón es ideal para reducir la variabilidad experimental, así como el número de ratones utilizados. La extracción de sangre permite un rendimiento de experimentos de tiempo, pero sólo se da información sobre los linfocitos circulantes y proporciona un número limitado de células 1-4. Dado que los linfocitos que circulan por el cuerpo y que residen en los ganglios linfáticos tienen propiedades diferentes, es importante examinar ambas localidades. La eliminación secuencial de los ganglios linfáticos mediante cirugía ofrece una oportunidad única para seguir una respuesta inmune o la expansión de células inmunes en el mismo ratón a través del tiempo. Además, esta técnica produce entre 1-2x10 6 células por ganglio linfático que es suficiente para PErform caracterización fenotípica y / o ensayos funcionales. La cirugía secuencial de los ganglios linfáticos o linfadenectomía ha sido utilizado con éxito por nosotros y otros 5-11. Aquí se describe cómo los nódulos linfáticos inguinales braquial y se puede quitar haciendo una pequeña incisión en la piel de un ratón anestesiados. Dado que la cirugía es superficial y se hace rápidamente, el ratón se recupera muy rápidamente, cura bien y no experimenta dolor excesivo. Cada segundo día, es posible cosechar uno o dos ganglios linfáticos permitiendo experimentos de tiempo. Esta técnica es por tanto adecuado para estudiar las características de los ganglios linfáticos de linfocitos que residen en el tiempo. Este enfoque es adecuado para diferentes diseños experimentales y creemos que muchos laboratorios se beneficiarán de la realización de cirugías secuenciales de los ganglios linfáticos.
Protocolo
1. Preparación Antes de la cirugía
Los ratones fueron tratados de acuerdo con el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales Directrices.
- Ratones anestesiar por inyección de ketamina / xilazina (150/300 mg / kg, ip) o por inhalación de isoflurano (2%, oxígeno 1L). Si está disponible, isoflurano se debe utilizar, ya que permite un mejor control de tiempo de anestesia y profundidad. Además, el oxígeno se administra al mismo tiempo que soporta las funciones fisiológicas de los animales. Además, isoflurano está directamente eliminado por los pulmones y por lo tanto no requiere metabolismo hepático o renal.
- Inyectar buprenor....
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Discusión
Hemos descrito un protocolo de cirugía LN que puede aplicarse a muchos sistemas experimentales. Aunque es muy útil para seguir la respuesta inmune o la homeostasis de las células inmunitarias, esta técnica tiene algunas limitaciones. En primer lugar, sólo cuatro LN pueden ser cosechadas. En segundo lugar, estudió la respuesta inmune debe ser sistémica u ocurre en las inguinales superficiales o braquial (piel de drenaje) LNS. Finalmente, el número de células recolectadas se ve influida por la calidad de la eliminación LN.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Damos las gracias a Lesage Sylvie y todos los miembros del laboratorio para la lectura crítica del protocolo. Este trabajo fue apoyado por una beca (MOP-77545) de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR). Nathalie Labrecque con el apoyo de una Beca Senior de FRSQ y Mélissa Mathieu recibió un NSERC Alexander Graham Bell Canada Becas de Posgrado.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Graefe Bellas Pinzas de primera calidad de patrón | Aparato de Harvard | 52-2144 | Fuertemente curvado, de 10 cm (4 pulgadas), 0,8 mm de la punta |
| Clip Michel Aplicar y eliminar Pinzas | Aparato de Harvard | 52-3779 | 12,5 cm (5 pulgadas) |
| Michel Clip 100 | Aparato de Harvard | 52-3746 | 7,5-1,75 mm |
| Temgesic (hidrocloruro de buprenorfina) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (clorhidrato de ketamina) | Boniche de Salud Animal | DIN: 01989529 | |
| Rompun (xilazina) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| El isoflurano | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears pomada para los ojos | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (gluconato de clorhexidina al 2% en alcohol isopropílico al 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
Referencias
- Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
- Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
- Zho....
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Reimpresiones y permisos
