El procedimiento se describe la colonización progresiva de seguir evaluando su impacto sobre el metabolismo hepático de acogida. La colonización se controla de manera no invasiva mediante la evaluación de la excreción urinaria de los metabolitos microbianos co-mediante RMN basados en los perfiles metabólicos, mientras que el metabolismo hepático es evaluado por alto ángulo Resolución Magic Spinning (MAS HR) de perfiles de RMN de la biopsia intactas.
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Artículo de método
La evaluación de alteraciones hepáticas metabólicas durante la colonización progresiva de la libre de gérmenes de ratón por 1 H espectroscopía de RMN
En este artículo
Resumen
Resumen
Es bien sabido que las bacterias intestinales contribuyen significativamente a la homeostasis de acogida, proporcionando una serie de beneficios tales como la protección inmunológica y la síntesis de la vitamina. También proveen el host con una considerable cantidad de nutrientes, por lo que este ecosistema un órgano metabólico esencial. En el contexto de la creciente evidencia de la relación entre la flora intestinal y el síndrome metabólico, la comprensión de la interacción metabólica entre el huésped y su microbiota intestinal se está convirtiendo en un reto importante de la biología moderna. 1-4
Colonización (también conocido como proceso de normalización) designa a la creación de micro-organismos en un antiguo libre de gérmenes de origen animal. Si bien es un proceso natural que ocurre al nacer, que también se utiliza en adultos libres de gérmenes animales de controlar el ecosistema floral intestinal y más determinar su impacto sobre el metabolismo de acogida. Un procedimiento común para controlar el proceso de colonización es utilizar el método de alimentación forzada con una single o una mezcla de microorganismos. Este método da como resultado una colonización muy rápida y presenta la desventaja de ser muy estresante 5. Por tanto, es útil para minimizar el estrés y para obtener un proceso de colonización más lenta para observar poco a poco el impacto de la creación de bacterias en el metabolismo de acogida.
En este artículo, se describe un procedimiento para evaluar la modificación del metabolismo hepático durante el proceso de colonización gradual mediante una técnica no destructiva del metabolismo de perfiles. Proponemos para controlar la colonización microbiana intestinal mediante la evaluación de la actividad metabólica microbiana intestinal refleja en la excreción urinaria de los metabolitos microbianos co-por un perfil de RMN basado metabólico. Esto permite una apreciación de la estabilidad de la actividad microbiana intestinal más allá del establecimiento estable del ecosistema microbiano intestinal suele evaluarse mediante el control de bacterias fecales por DGGE (electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante). 6 Elcolonización se lleva a cabo en un ambiente abierto convencional y se inicia con una arena sucia contaminada con animales convencionales, que servirá como control. Los roedores son animales coprófagos, lo que garantiza una colonización homogénea a lo descrito previamente 7.
Perfiles metabólicos hepáticos se mide directamente a partir de una biopsia de hígado intacto con una H de alta resolución Magic Angle Spinning espectroscopía de RMN. Esta técnica semi-cuantitativa ofrece una forma rápida de evaluar, sin dañar la estructura celular, los principales metabolitos, como los triglicéridos, la glucosa y el glucógeno con el fin de estimar más la compleja interacción entre el proceso de colonización y el metabolismo hepático 70-10. Este método también se puede aplicar a cualquier tejido de la biopsia 11,12.
Protocolo
1. La colonización de animales libres de gérmenes y la recogida de muestras
- Eliminar animales libres de gérmenes de aisladores y de la casa en una sala de cría en jaulas convencionales equipados con filtro delante de los animales convencionales que servirán como controles (Figura 1).
- Mezclar medio de la camada (3 días) tomado de la caja de control convencional con la materia fecal de los animales libres de gérmenes. Siempre mantenga un tercio de la basura convencional sucia cada vez que hay que renovar con el fin de mantener un nivel de bacterias (mantener al menos durante 3 días).
- Recoger la orina en un microtubo de 1,5 ml por el manej....
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Discusión
En este protocolo, que describe un procedimiento de colonización progresiva en un entorno abierto para seguir investigando el impacto de la microbiota intestinal en el metabolismo hepático evaluado por 1 H RMN de perfiles de recursos humanos del MAS intacta biopsia. Varios métodos de colonización han sido descritos en la literatura. Los métodos más comunes para colonizar los animales con una microbiota definida son una sonda nasogástrica o beber agua contaminada 19,20. Inoculación fecal también pue.......
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Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Todos los espectros de RMN utiliza como ejemplos ilustrativos se derivan de un estudio publicado anteriormente 7, que fue apoyado financieramente por Nestlé.
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Materiales
Tabla de reactivos y equipos específicos:
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| 2,5 mm microtubo | Nueva Era | NE-H5/2.5-V-Br | |
| 1,7 mm tubo capilar | Sigma-Aldrich | NORS175001 | |
| Adaptador capilar | Nueva Era | NE-325-5/1.7 | |
| La extracción de la barra | Nueva Era | NE-341-5 | |
| HR-MAS rotor BL4 con 50 l esférica de teflón kit de espaciadores | Bruker | HZ07213 | |
| Kit de herramientas para 50 inserciones l | Bruker | B2950 | |
| Avance III 600MHz RMN | Bruker | ||
| 1 H HR MAS RMN sólidos sonda | Bruker | ||
| Óxido de deuterio 99,9% | Sigma-Aldrich | 530867-1L | |
| 3 - (trimetilsilil) propiónico ácido-d 4 (TSP) | Sigma-Aldrich | 269913 |
Referencias
- Cani, P. D., Delzenne, N. M. Gut microflora as a target for energy and metabolic. Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 10, 729-734 (2007).
- Ley, R. E., Turnbaugh, P. J., Klein, S., Gordon, J. I. Microbial ecology: human gut microbes associated with obesity. Nature. ....
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Etiquetas
Perfilado metab lico hep ticocolonizaci n de ratones ax nicosespectroscopia de RMN 1Hgiro m gico de alta resoluci nan lisis de metabolitos urinariospreparaci n de biopsia hep ticainteracci n de la microbiota intestinalan lisis de rutas metab licasadquisici n de espectros de RMNseguimiento de la colonizaci n progresiva
