Caracterización electrofisiológica de las respuestas neuronales es importante para entender la función del cerebro y para guiar la colocación de los tintes para el rastreo vía. Sin embargo, muchos estudios se realizan en animales anestesiados. Para entender la función del cerebro sin anestesia, hemos desarrollado un método para registrar las propiedades neuronales de respuesta e inyectar tintes en el ratón despierto.
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Artículo de método
Preparación de un ratón para la grabación de Despierta respuestas neuronales y de inyección de trazadores
En este artículo
Resumen
Resumen
Es bien conocido que la anestesia altera las propiedades neuronales de respuesta en diversas regiones del cerebro. 13. En el sistema auditivo, las propiedades fundamentales de respuesta de las neuronas del tronco cerebral como el umbral, la especificidad de frecuencia, y las bandas laterales inhibidoras se alteran de manera significativa bajo anestesia 1-2. Estas observaciones se le solicite fisiólogos a buscar formas de grabar a partir de las neuronas individuales, sin los efectos contaminantes de la anestesia. Un resultado fue una preparación descerebración, donde se secciona el tronco cerebral completamente en el nivel del mesencéfalo 4. Los inconvenientes de esta preparación es una cirugía formidable, la eliminación de bajar las proyecciones del cerebro anterior, y una incapacidad para utilizar la estimulación sensorial para examinar las estructuras por encima del cerebro medio. Una estrategia diferente ha sido la implantación de conjuntos de electrodos crónicamente a grabar a partir de neuronas individuales y grupos de múltiples unidades, mientras el animal está despierto y / o se comporta de 5,6 7-9 al ratón 10-12. Usando este método, somos capaces de llevar a cabo registros electrofisiológicos durante varios días en el ratón anestesiado. Al final de las sesiones de grabación, podemos inyectar un colorante de reconstruir posiciones de los electrodos y los sitios de grabación o se inyecta un trazador de manera que las rutas hacia y desde los lugares de grabación se puede determinar. Este método permite también grabaciones aisladas de neuronas individuales durante varios días sin que los anestésicos de uso.
Protocolo
1. Reposacabezas Información general
- Para montar una hecha a la medida de cabeza después, inserte un 1/16 "de acero inoxidable roll-pin perpendicularmente en un agujero perforado en un 3/32" barra de acero inoxidable en forma de cruz. La pieza vertical de la cabeza-mensaje debe ser de aproximadamente 20 mm y la pieza transversal horizontal de aproximadamente 15 mm. Toque un extremo de la varilla vertical para aceptar un tornillo # 1-72. (Fig. 1).
- Durante la cirugía y la grabación, la cabeza posterior está fijado en un latón hecha a la medida o barra de montaje de aluminio con un ....
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Discusión
La ventaja del sistema de sujeción de cabeza después de experimentos electrofisiológicos y neuroanatómicos en el ratón es que los experimentos pueden llevarse a cabo con ratones anestesiados, despierta, la eliminación de la contaminación potencial de respuesta debido a las drogas anestésicas. Además, la puesta en marcha se puede utilizar en varios días para permitir el uso de animales más eficiente.
La mayoría de los componentes de la cabeza-post están disponibles fuera de la plataforma. Sól.......
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Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Con el apoyo de la NSF 0920060 de subvención, la subvención del NIH DC004395, NHMRC subvención de 1.009.482, Madrid Oficina de Ciencia y la Investigación Médica, y el Passe Garnett y Rodney Williams Memorial Foundation.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Gel de Etch para la limpieza de cráneo antes de cemento dental | Henry Schein | 101-5396 | 12/pk con 1,2 ml jeringas |
| Manual para cemento dental | Kerr Optibond | 25881 | 8 ml botella |
| Adhesivo para el cemento dental | Kerr Optibond | 25882 | 8 ml botella |
| Aplicadores para cemento dental | Kerr Optibond | 24680 | 200/pk |
| Cemento dental | Carisma, Heraeus Kulzer | 66000085 | Vuelva a llenar la jeringa 4gm |
| Tungsteno Rod (perno de tierra) | Los sistemas AM | 717200 | 0,010 "de diámetro |
| Economía UV curado de luz | Henry Schein | CU-80 | |
| Jefe post | Construido en la casa | ||
| Barra de montaje | Construido en la casa | ||
| Bloque de montaje | Construido en la casa | ||
| Marco estereotáxico | David Kopf Instruments | 902 | |
| Mouse y el adaptador de ratas recién nacidas | Stoelting | 51625 | |
| Deltaphase Pad isotérmico | Braintree Scientific, Inc. | 39DP |
Referencias
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X.
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Reimpresiones y permisos
