Se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen el eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC). Debido a que la codificación neural de la localización sigue una organización dorsal-ventral en el MEC, estos procedimientos de facilitar la investigación de los mecanismos celulares importantes para la navegación y la memoria.
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Artículo de método
Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial
En este artículo
Resumen
Resumen
Ciencia de la Computación en el cerebro se basa en las neuronas que responden adecuadamente a las entradas sinápticas. Las neuronas se diferencian en su complemento y la distribución de los canales iónicos de membrana que determinan la forma en que responden a las entradas sinápticas. Sin embargo, la relación entre estas propiedades y función celular neuronal en animales de comportarse no se entiende bien. Una aproximación a este problema consiste en investigar topográficamente organizadas circuitos neuronales en el que la posición de los mapas de neuronas individuales en la información que codificar o cálculos que llevan a cabo 1. Los experimentos con este enfoque sugiere principios para el ajuste de las respuestas sinápticas que subyacen a la codificación de información en los circuitos sensoriales y cognitivas 2,3.
La organización topográfica de las representaciones espaciales a lo largo del eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC) ofrece una oportunidad para establecer relaciones entre los mecanismos celulares y cálculos importante para la cognición espacial. Las neuronas de la capa II del MEC roedores codificar la localización del uso de la red-como disparar los campos 6.4. Para las neuronas que se encuentran en posiciones dorsal en el MEC la distancia entre los campos de tiro individuales que forman una rejilla es del orden de 30 cm, mientras que para las neuronas en las posiciones progresivamente más ventral esta distancia aumenta hasta más de 1 m. Varios estudios han revelado las propiedades celulares de las neuronas en la capa II del MEC que, como la separación entre los campos de la rejilla de cocción, también se diferencian de acuerdo a su posición dorsal-ventral, lo que sugiere que estas propiedades celulares son importantes para el cálculo espacial 2,7-10.
Aquí se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen la medida de dorsal-ventral de la investigación MEC habilitación de la organización topográfica de las propiedades biofísicas y anatómico de las neuronas del MEC. La posición dorso-ventral del n identificadoseurons en relación con puntos de referencia anatómicos es difícil establecer con precisión con los protocolos que utilizan las rebanadas horizontales de MEC 7,8,11,12, ya que es difícil establecer puntos de referencia para la exacta ubicación de dorsal-ventral de la rebanada. Los procedimientos aquí descritos permiten la medición precisa y consistente de la ubicación de las celdas grabadas a lo largo del eje dorsal-ventral del MEC, así como la visualización de los gradientes moleculares 2,10. Los procedimientos se han desarrollado para su uso con ratones adultos (> 28 días) y se han empleado con éxito con ratones hasta 1,5 años de edad. Con ajustes que podría ser utilizado con más jóvenes ratones u otras especies de roedores. Un sistema estandarizado de preparación y de medición ayudará a la investigación sistemática de las propiedades celulares y microcircuitos de esta zona.
Protocolo
1. Preparación Slice parasagital
1,1 Disecte hemisferios cerebrales
Todos los experimentos con animales deben seguir de revisión de ética local y las normativas nacionales. En el caso de los experimentos descritos aquí, el trabajo se ajusta a los animales del Reino Unido (Procedimientos Científicos) de 1986. Habitualmente usamos la dislocación cervical sin anestesia para practicar la eutanasia con el ratón antes de retirar el cerebro. Alternativamente, el ratón puede ser bajo anestesia, pero en este caso puede ser necesario para determinar si la elección del anestésico influye propiedades neuronales.
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Discusión
Para facilitar la investigación de las propiedades del circuito MEC que siguen a una organización dorsal-ventral que hemos descrito aquí con detalle un procedimiento para producir una preparación de corte parasagital que preserva la medida dorsal-ventral del MEC.
Los pasos críticos
Extracción del cerebro del animal. Tenga especial cuidado para evitar ejercer presión sobre el cerebro. Esto es más importante que la rápida eliminación del cerebro.
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Divulgaciones
No hay nada que revelar.
Agradecimientos
Somos las gracias por su apoyo: Beca de la Commonwealth del Reino Unido la financiación de la Comisión (HP), EPSRC (HP), BBSRC (NMF) y la Unión Europea, las acciones Marie Curie (NMF).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Corte ACSF (mM) | Norma ACSF (mM) | Solución interna (mM) | CASNumber | Proveedor Número de catálogo | |
| NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | Sigma S9888 | |
| NaH 2 PO 4 | 1.2 | 1.2 | 13472-35-0 | Sigma 71505 | |
| KCl | 2.5 | 2.5 | 10 | 7447-40-7 | Sigma P3911 |
| NaHCO $ 3 | 25 | 25 | 144-55-8 | Fischer S/4240 | |
| Glucosa | 25 | 20 | 50-99-7 | Sigma G5767 | |
| Sacarosa | 75 | 57-50-1 | Sigma S5016 | ||
| CaliforniaCl 2 | 0.5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
| MgCl 2 | 7 | 1 | 2 | 7786-30-3 | Sigma 63020 |
| K Gluconato | 130 | 299-27-4 | Sigma G4500 | ||
| HEPES | 10 | 7365-45-9 | Sigma H3375 | ||
| EGTA | 0.1 | 67-42-5 | Sigma E4378 | ||
| Na 2 ATP | 2 | 34369-07-8 | Sigma A7699 | ||
| Na 2 GTP | 0.3 | 36051-31-7 | Sigma G8877 | ||
| NaPhospho-creatina | 10 | 19333-65-4 | Sigma P7936 | ||
| Biocitina (opcional) | 2.7 | 576-19-2 | Sigma B4261 |
Tabla 1. Corte ACSF, ACSF estándar y K-gluconato recetas solución interna.
Referencias
- O'Donnell, C., Nolan, M. F. Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits. Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).
- Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F.
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Reimpresiones y permisos
