Con óvulos de<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Como un<em&gt; En vivo</em&gt; Modelo de la inflamación pulmonar inducida por helmintos

Resumen

Huevos de Schistosoma mansoni son potentes estimuladores del tipo T helper 2 (Th2) la respuesta inmune, característico de la infección por el parásito, el asma y la inflamación alérgica. Este protocolo utiliza S. mansoni de inyección de huevos para generar un recuento de CD4 Th2 citoquinas inducida por la respuesta inflamatoria en el pulmón, caracterizada por la formación de un granuloma pulmonar alrededor del huevo, la eosinofilia y la activación de los macrófagos alternativa.

Resumen

Parásitos Schistosoma son trematodos de la sangre que infecta a un estimado de 200 millones de personas en todo el mundo ^1. En la infección crónica por Schistosoma, la patología severa, incluyendo la fibrosis hepática y esplenomegalia, es causada por la respuesta inmune a los huevos del parásito en lugar del propio parásito ^2. Huevos de parásitos inducir una respuesta Th2 caracterizada por la producción de IL-4, IL-5 e IL-13, la activación alternativa de macrófagos y el reclutamiento de eosinófilos. A continuación, describimos la inyección de huevos de Schistosoma mansoni como un modelo para examinar los parásitos específicos de las respuestas de citocinas Th2 en el pulmón y los ganglios linfáticos de drenaje, la formación de granulomas pulmonares que rodean el huevo, y la inflamación de las vías respiratorias.

Tras la sensibilización intraperitoneal y desafío intravenosa, S. huevos mansoni son transportados a los pulmones a través de las arterias pulmonares donde están atrapadas dentro del parénquima pulmonarpor granulomas compuestos por linfocitos, eosinófilos y macrófagos activados alternativamente ^3-6. Asociado con formación de granulomas, inflamación en los espacios bronco-alveolares, la expansión de los ganglios linfáticos de drenaje y activación de células T CD4 puede ser observado. A continuación le detallamos el protocolo para el aislamiento de huevos de Schistosoma mansoni a partir de hígados infectados (modificado a partir de ^7), la sensibilización y desafiar los ratones, y la recuperación de los órganos (lavado broncoalveolar (LBA), pulmón y ganglios linfáticos de drenaje) para su análisis. También se incluyen histológica representativa y los datos inmunológicos y sugerencias para el análisis inmunológico adicional.

En general, este método proporciona un modelo in vivo para investigar helmintos inducidos por las respuestas inmunológicas en el pulmón, el cual es ampliamente aplicable al estudio de las enfermedades inflamatorias Th2, incluyendo la infección por helmintos, enfermedades fibróticas, la inflamación alérgica y el asma. Las ventajas de este modelo para el estudio de típicoe 2 inflamación en el pulmón incluyen la reproducibilidad de un potente respuesta Th2 inflamatoria en el pulmón y ganglios linfáticos de drenaje, la facilidad de evaluación de la inflamación mediante el examen histológico de los granulomas que rodean el óvulo, y la posibilidad de almacenamiento a largo plazo del parásito huevos.

Protocolo

1. Depuradora Schistosoma mansoni Huevos

1. Infect ratones Swiss-Webster con cercarias de esquistosomas, que es la etapa infecciosa en el ciclo de vida del Schistosoma ^8. Por otra parte, obtener ratones infectados con esquistosomas del NIAID Centro de Recursos de la esquistosomiasis ( http://www.schisto-resource.org/~~V ). Deja ratones para 6-7 semanas después de la infección, momento en el cual punto, los huevos están presentes en el hígado y puede ser recuperado como se describe a continuación (ver fig. 1).
2. La eutanasia de los ratones con e....

Discusión

Aquí, un modelo que emplea Schistosoma mansoni huevos para inducir inflamación pulmonar tipo 2 se describe. Los rasgos característicos de este modelo incluyen la potente respuesta inmune tipo Th2, inflamación de las vías y la formación de granulomas pulmonares. Desde estos parámetros dependen de las respuestas de células CD4 + Th2 ^11, este es un modelo útil para investigar los efectos de las supresiones específicas de proteínas o de linaje específico-en respuestas de las células Th2. Aquí se incluyen.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Reactivo	Tamaño / Descripción	Empresa	Catálogo #
Colagenasa / dispasa	500 mg	Roche Ciencias Aplicadas	11 097 113 001
Diff Quik Stain Hema 3	Empacar	Fisher Scientific Co. LLC	122-911
DMEM	Líquido	Gibco	11965
Falcon 50 ml	Empacar	Halcón	352070
Intramedic PE Tubo	0,58 mm	Becton Dickinson and Co.	427410
El isoflurano	250 ml	Abad de Sanidad Animal	52600405
La ketamina	100 mg / ml	Fort Dodge, de Sanidad Animal	N / A
Anticuerpo del receptor de manosa	Biotina	AbD Serotec	MCA2235B
Filtro metálico	Colador de cocina estándar	Objetivo	Laurentiis
Paraformaldehído	16%	Electron Microsc. Ciencias de la	15710
La penicilina / estreptomicina	100x	Gibco	15070
Percoll	1 Litro	GE Healthcare Biosciences	17 01 0891
Anticuerpos RELMα	50 ug	Peprotech	500-P214
Hilo quirúrgico	2,0 USP 100 yardas	Surgical Corp. Especialidades	SP118
Aguja de la jeringa	23g, 3/4 pulgada	BD Vacutainer laboratorio. Med.	305143
EE.UU. estándar de pruebas tamiz	150 micras, 0,0059 "	WS Tyler, Inc.	ASTME-11, Especificaciones. N º 100
Xilacina	20 mg / ml	Mayordomo	N / A