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Mantenimiento de antígeno específico de líneas de células T o clones de la cultura requiere rondas de antígeno de la activación inducida por separado por las fases de expansión celular 1,2. Además de la interleucina 2 a los medios de cultivo durante la fase de expansión es necesaria para prevenir la muerte celular y suficiente para mantener a corto plazo líneas de células T, pero se ha demostrado que aumenta la polarización Th1 3. Sustitución de la interleucina 2 por el factor de crecimiento de las células T (TCGF), que contiene una mezcla de citoquinas es más eficaz que la interleucina 2 en el mantenimiento a largo plazo las líneas de células T in vitro 3. Por otra parte, TCGF se pueden preparar fácilmente en grandes cantidades en el laboratorio y es mucho más barato que la interleucina 2 recombinante.
Aquí, se muestra cómo preparar TCGF a partir de sobrenadantes de esplenocitos de ratas cultura. Para este procedimiento, se cosecha el bazo de ratas Lewis ingenuo sacrificados por el timo y la extracción de sangre. Preparamos una sola célula suspensiones de los bazos, Lyze los glóbulos rojos por choque osmótico, y las semillas de los esplenocitos en medio de cultivo. Las células son estimuladas con concanavalina A, un mitógeno que no activa selectivamente los linfocitos T de rata, que induce la producción de citoquinas. El sobrenadante se recoge la cultura 48 horas más tarde andexcess concanavalina A se une a la alfa metil mannoside para evitar la activación de líneas de células T a la que se añadirá TCGF. El TCGF entonces esterilizada por filtración, alícuotas, y almacenadas a -20 ° C.