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Una amplia investigación ha proporcionado evidencias que sugieren que la proteína de amplios plegado en la célula es un proceso de co-traduccional 1-5. Sin embargo, el camino exacto que sigue la cadena polipeptídica durante la co-translacional de plegado para alcanzar su forma funcional es todavía un enigma. A fin de comprender este proceso y para determinar la conformación exacta de los compuestos intermedios plegables co-traduccionales, es esencial para desarrollar técnicas que permiten el aislamiento de RNC que transportan las cadenas nacientes de tamaños predeterminados para permitir su análisis estructural adicional.
SecM (monitor de secreción) es una E. 170 aminoácidos E. proteína que regula la expresión de la corriente abajo Seca (secreción de conducción) ATPasa en el operón SECM-seca 6. Nakatogawa e Ito originalmente encontrado que una secuencia de 17 aminoácidos de largo (150-FSTPVWISQA QGIRA G P-166) en la región C-terminal de la proteína SecM es suficiente y necesaria paraoriginar la detención de la elongación en el SecM Gly165, produciendo de esta manera peptidil-tRNA-glicil estable vinculado a la P-ribosomal sitio de 7-9. Más importante aún, se encontró que esta secuencia de 17 amino ácido larga se pueden fusionar a la C-terminal de virtualmente cualquier proteína de longitud completa y / o truncado permitiendo así la producción de RNC llevan cadenas nacientes de tamaños predeterminados 7. Así, cuando se fusiona o se inserta en la proteína diana, la secuencia SecM estancamiento produce detención de la elongación de la cadena polipeptídica y genera RNC estables tanto in vivo en E. células de E. e in vitro en un sistema libre de células. Centrifugación en gradiente de sacarosa se utiliza además para aislar RNC.
Los RNC aisladas pueden ser utilizados para analizar las características estructurales y funcionales de los compuestos intermedios plegables co-traduccionales. Recientemente, esta técnica se ha utilizado con éxito para obtener información sobre la estructura de los ribosomas varias cadenas unidas nacientes 10,11. Aquí se describe el aislamiento de las especies bovina Gamma-B Cristalina RNC fusionado a SecM y generada en un sistema de traducción in vitro.