Erratum: Reagregación de cultivos de timo

Resumen

Se realizó una corrección en: Cultivos de Timo Reagregados. Se republicó un resumen revisado debido a un error del editor.

Resumen

Se realizó una corrección en: Cultivos de timo reagregados. Se republicó un resumen revisado debido a un error del editor. El resumen se corrigió a:

Las células estromales dentro de los tejidos linfoides se organizan en estructuras tridimensionales que forman un armazón que se cree que controla la migración y el desarrollo de las células hematopoyéticas. Es importante destacar que el mantenimiento de esta organización tridimensional parece ser crítico para la función normal de las células estromales, ya que a menudo se ha demostrado que los cultivos en monocapa bidimensional solo pueden sostener fragmentos individuales de la función del tejido linfoide. En el timo, redes complejas de células epiteliales corticales y medulares actúan como un entramado que controla el reclutamiento, la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de los precursores linfoides mientras atraviesan el proceso multietapa del desarrollo de linfocitos T intratímicos. Comprender el papel funcional de cada compartimento estromal individual en el timo es esencial para determinar cómo el timo impone la discriminación entre lo propio y lo no propio. Aquí describimos una técnica en la que aprovechamos la plasticidad de los tejidos fetales para volver a asociarse en estructuras tridimensionales completas in vitro, tras su disgregación enzimática. La disociación de lóbulos tímicos fetales en mezclas celulares heterogéneas, seguida de su separación en componentes celulares individuales, se combina luego con la reasociación in vitro de estos tipos celulares deseados en estructuras reagregadas tridimensionales en proporciones definidas, lo que proporciona la oportunidad de investigar aspectos particulares del desarrollo de linfocitos T en condiciones celulares definidas. (Este artículo se basa en un trabajo publicado inicialmente en Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 páginas 185-196).

desde

En el timo, los timocitos inmaduros CD4+8+ que expresan genes de las cadenas α y β del receptor de células T reordenados al azar experimentan eventos de selección positiva y negativa según su capacidad para reconocer péptidos autólogos/moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) expresados por las células estromales tímicas. El análisis in vivo del papel de las células estromales tímicas durante la selección intratímica resulta difícil debido a la complejidad celular del microentorno tímico en el timo adulto en estado estable, y por la falta de estrategias adecuadas de direccionamiento para manipular la expresión génica en compartimentos estromales tímicos específicos. Hemos demostrado que el microentorno tímico puede manipularse fácilmente in vitro mediante el uso de cultivos organoides de timo reagregados, que permiten la preparación de lóbulos tímicos tridimensionales a partir de células estromales y linfoides definidas. Aunque otros sistemas in vitro sustentan algunos aspectos del desarrollo de linfocitos T, el cultivo organoide de timo reagregado sigue siendo el único sistema in vitro capaz de sostener eventos eficientes de selección de timocitos mediados por las clases I y II del MHC, y por tanto puede utilizarse como una herramienta eficaz para estudiar la regulación celular y molecular de la selección positiva y negativa en el timo.

Protocolo

Se realizó una corrección en: Cultivos de Timo Reagregados. Se republicó un resumen revisado debido a un error del editor. El resumen fue corregido a:

Las células estromales dentro de los tejidos linfoides están organizadas en estructuras tridimensionales que forman un andamiaje que se cree controla la migración y el desarrollo de las células hematopoyéticas. Es importante destacar que el mantenimiento de esta organización tridimensional parece ser fundamental para la función normal de las células estromales, ya que a menudo se ha demostrado que los cultivos en monocapa bidimensional solo pueden sostener fragmentos individuales de la función del tejido linfoide. En el timo, redes complejas de células epiteliales corticales y medulares actúan como un armazón que controla el reclutamiento, la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de los precursores linfoides mientras atraviesan el proceso multietapa del desarrollo tímico de linfocitos T. Comprender el papel funcional de cada compartimento estromal en el timo es esencial para determinar cómo el timo impone la discriminación entre lo propio y lo no propio. Aquí describimos una técnica en la que aprovechamos la plasticidad de los tejidos fetales para volver a asociarse en estructuras tridimensionales completas in vitro, tras su disgregación enzimática. La disociación de lóbulos tímicos fetales en mezclas celulares heterogéneas, seguida de su separación en componentes celulares individuales, se combina luego con la reasociación in vitro de estos tipos celulares deseados en estructuras reagregadas tridimensionales en proporciones definidas, lo que proporciona la oportunidad de investigar aspectos específicos del desarrollo de linfocitos T en condiciones celulares determinadas. (Este artículo se basa en un trabajo publicado inicialmente en Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 páginas 185-196).

desde

En el timo, los timocitos inmaduros CD4+8+ que expresan genes de las cadenas α y β del receptor de células T reordenados al azar experimentan eventos de selección positiva y negativa según su capacidad para reconocer péptidos autólogos/moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) expresados por las células estromales tímicas. El análisis in vivo del papel de las células estromales tímicas durante la selección intratímica resulta difícil debido a la complejidad celular del microentorno tímico en el timo adulto en estado estable, y por la falta de estrategias adecuadas de direccionamiento para manipular la expresión génica en compartimentos estromales tímicos específicos. Hemos demostrado que el microentorno tímico puede manipularse fácilmente in vitro mediante el uso de cultivos organoides de timo reagregados, que permiten la preparación de lóbulos tímicos tridimensionales a partir de células estromales y linfoides definidas. Aunque otros sistemas in vitro sustentan algunos aspectos del desarrollo de linfocitos T, el cultivo organoide de timo reagregado sigue siendo el único sistema in vitro capaz de sostener eventos eficientes de selección de timocitos mediados por las clases I y II del MHC, y por tanto puede utilizarse como una herramienta eficaz para estudiar la regulación celular y molecular de la selección positiva y negativa en el timo.