Antígenos funcional protegido glóbulos rojos por la membrana injerto de compactos Poligliceroles hiperramificados

Resumen

La modificación de membrana celular de las células rojas de la sangre (eritrocitos) con poliglicerol hiperramificado (HPG) se presenta. Los glóbulos rojos modificados se caracterizaron por partición acuoso de dos fases, la fragilidad osmótica y la lisis mediada por el complemento. El camuflaje de proteínas de superficie y los antígenos se evaluó usando la citometría de flujo y Micro Typing System (MTS) tarjetas de sangre fenotipificación.

Resumen

Glóbulos rojos (RBC) transfusión es vital para el tratamiento de una serie de problemas médicos agudos y crónicos, como la talasemia mayor y la anemia de células falciformes ^1-3. Debido a la presencia de gran cantidad de antígenos en la superficie de glóbulos rojos (~ 308 antígenos conocidos ^4), los pacientes en la terapia de transfusión de sangre crónica desarrollar aloanticuerpos debido a la coincidencia de la señorita antígenos menores en los glóbulos rojos transfundidos ^{4, 5.} El injerto de polímeros hidrófilos tales como polietilenglicol (PEG) y poliglicerol hiperramificado (HPG) forma una capa sobre la membrana de exclusión RBC que impide la interacción de los anticuerpos con los antígenos de superficie sin afectar el paso de moléculas pequeñas tales como el oxígeno, la glucosa y los iones ^3. En la actualidad no hay ningún método disponible para la generación de universales células rojas de la sangre de los donantes, en parte, debido a la enorme reto presentado por la presencia de gran número de antígenos (proteínas y carbohidratos basados) en la superficie de glóbulos rojos y la dl desarrollo de tales métodos mejorará significativamente la seguridad de la transfusión, y dramáticamente mejorar la disponibilidad y el uso de los glóbulos rojos. En este informe, los experimentos que se utilizan para desarrollar antígenos funcionales glóbulos rojos protegidas por la membrana de injerto de HPG y su caracterización se presentan. HPGs son altamente biocompatibles polímeros compactos ^{6, 7,} y se espera que se encuentra dentro del glicocálix célula que rodea la membrana lipídica ^{8, 9} y la máscara de antígenos de superficie de RBC ^{10, 11.}

Protocolo

A. Modificación de poliglicerol hiperramificado (SS-HPG)

1. Place liofilizó HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) en un matraz de fondo redondo y se seca durante la noche bajo vacío a 90 ° C.
2. Refrigerar el matraz a temperatura ambiente, y se disuelve el HPG se secó en piridina anhidra (3 ml).
3. Para funcionalizar aproximadamente ocho grupos hidroxilo en HPG con grupos carboxilo, añadir una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina (una gota de 5 mg / ml de solución en piridina) a la solución HPG. A esta mezcla, agregar anhídrido succínico, (0,0067 g, 0,0664 mmol) disuelto en 0,5 ml de piridina gota a gota durante 10 min. Se agita la mezcla duran....

Resultados

Camuflaje de antígeno Rhesus D y proteína de superficie CD47 RBC se cuantificaron por citometría de flujo utilizando anticuerpos monoclonales marcados fluorescentes, y un resultado representativo se da en la figura 1. En caso de HPG de injerto de glóbulos rojos (gris), la intensidad de la disminución de la señal (pico desplaza a la izquierda) en comparación con el control de los glóbulos rojos (rojo y verde) que indica una reducción en la unión a los anticuerpos a la superficie celular que indican el en.......

Discusión

Los glóbulos rojos de donantes universales tienen un gran potencial en la disponibilidad de sangre y la mejora de la seguridad de la terapia transfusional. Los glóbulos rojos también se consideran prometedores vehículos de administración de fármacos debido a su larga circulación y la biocompatibilidad inherente ^{14, 15.} Los experimentos presentados en este trabajo evaluar la características in vitro de HPG eritrocitos modificados. La propiedades in vitro y en circul.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Glicidol	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
Trimethylolpropane	Fluka		(ON, Canadá)
Metilato de potasio	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
Piridina anhidra	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
4-dimetilaminopiridina	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
Anhídrido succínico	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
Acetona	Fisher Scientific		(ON, Canadá)
Dimetilformamida anhidra	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
N-hidroxisuccinimida	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
N, N'-diisopropilcarbodiimida	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
MTS tarjetas			Micro Typing System (MTS) tarjetas (FL, EE.UU.)
Dextrano 500 kDa	Pharmacia Fine Chemicals		(Suecia)
PEG 8 kDa	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
FITC monoclonal anti-Rhesus D (RhD)	Cociente Biodiagnostics		(PA, EE.UU.)
PE monoclonal anti-CD47	BD Biosciences		(Nueva Jersey, EE.UU.)
Reactivo de Drabkin	Sigma Aldrich		(ON, Canadá)
			Tabla. Productos químicos y reactivos utilizados para el injerto de polímeros HPG a RBC membrana y su análisis.