Preadipocitos primarios blancas aisladas de tejidos adiposos blancos en ratones se pueden diferenciar en células beige / brite. Se presenta aquí un sistema fiable modelo celular para estudiar la regulación molecular de "color" de la grasa blanca.
Artículo de método
Preadipocitos primarios blancas aisladas de tejidos adiposos blancos en ratones se pueden diferenciar en células beige / brite. Se presenta aquí un sistema fiable modelo celular para estudiar la regulación molecular de "color" de la grasa blanca.
Adipocitos marrones tienen la capacidad de desacoplar la cadena respiratoria en las mitocondrias y disipar la energía química en forma de calor. Desarrollo de UCP1-positivas adipocitos marrones en los tejidos adiposos blancos (llamados células beige o brite) se induce por una variedad de señales ambientales tales como la exposición al frío crónica o por agonistas PPAR, por lo tanto, este tipo de célula tiene potencial como una diana terapéutica para tratamiento de la obesidad. Aunque la mayoría de inmortalizadas líneas de adipocitos no puede recapitular el proceso de "color" de la grasa blanca en cultivo, adipocitos primarios aislados de la fracción del estroma vascular en el tejido subcutáneo adiposo blanco (WAT) proporcionar un sistema celular fiable para estudiar el control molecular de desarrollo de las células beige / brite . Aquí se describe un protocolo para el aislamiento eficaz de los preadipocitos primarios y para inducir la diferenciación de células de color beige / brite en cultivo. El efecto de dorado se puede evaluar mediante la expresión de la grasa marrón selectivo marcaERS tales como UCP1.
La obesidad es el aumento dramáticamente en todo el mundo y ahora se considera uno de los problemas más graves para la salud pública 1. Esta condición está relacionada con un desequilibrio en la ingesta de energía relativa a los gastos y resultados en el exceso de energía almacenada en forma de lípidos en el tejido adiposo blanco (WAT). WAT ampliada se asocia con una mayor masa corporal y el peso, mientras que el tejido adiposo marrón tiene la capacidad de disipar el exceso de energía para producir calor. Por lo tanto BAT puede funcionar como protección contra el frío y la obesidad 2,3. Esto se consigue mediante desacoplamiento del transpo....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
1. Preparar Medio Digestión
Hacer 5 ml por 5 ratones por tejido (aproximadamente 1 ml / 1 g de tejido adiposo).
2. Disecar el tejido adiposo de ratones
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Browning de adipocitos primarios se puede acceder mediante la medición de la expresión de ARNm de UCP1 y otros genes de la grasa marrón-específicos o selectivos de QRT-PCR. Presentado en la Figura 1 son los datos de expresión génica en el inguinal-derivados adipocitos primarios. Las células fueron inducidas a diferenciarse en la presencia de dos diferentes dosis de rosiglitazona en 50 nm y 500 nm, respectivamente. Un subconjunto de células se trató con forskolina en 10 mM durante 4 horas antes .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Aquí presentamos un sistema fiable celular para estudiar el desarrollo de las células de color beige / brite en la enseñanza primaria adipocitos cultivados en ratones. En comparación con varias líneas celulares inmortalizadas disponibles, este sistema es probable que ofrezca mayor relevancia para el pardeamiento de la grasa blanca in vivo.
A pesar de que el estudio de estos adipocitos primarios ofrece algunas ventajas, también existen algunas limitaciones y preocupaciones que son im.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto financieros.
Damos las gracias a Haruya Ohno, Shinoda Kosaku, Sharp Louis, Tomoda Emi, y Lauren Ruiz de discusión, ayuda técnica y asistencia editorial sobre el manuscrito. Este trabajo fue apoyado por becas de los NIH (DK087853), del Programa de Investigación Biomédica y de Breakthrough Asubio Pharm Inc. para SKULA fue apoyado por una COMPARTIR becas de doctorado de la Universidad de Copenhague y la UE FP7 proyecto Diabat (SALUD-F2 -2,011-278.373) a Lise Madsen y Kristiansen Karsten. También reconocemos la DERC centro subvención (NIH P30 DK063720).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo | |||
| Colaginasa D | Roche | 11088874103 | |
| Dispasa II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl 2 | |||
| Medio DMEM | Pescador | 10017-CV | Con 2,5 g / l de glucosa y L-glutamina sin piruvato de sodio |
| Insulina | |||
| T3 (3,3 ',5-triyodo-L-tironina) | Sigma | T-2877 | |
| La indometacina | Sigma | I-7378 | |
| Dexametasona | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazona | Sigma | R-2408 | |
| Equipo | |||
| Colágeno platos recubiertos | BD | 354450 | Placas de 10 cm |
| 70 micras filtro | BD Falcon | 352350 | Celular colador, 70 m nylon 1/ea |
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE
Solicitar permiso