Artículo de método

Ensayo Preferencia luz para estudiar innata y circadiano Photobehavior Regulado de

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DOI:

10.3791/50237

20 de abril de 2013

En este artículo

Resumen

Aquí se describe una prueba de preferencia de luz-oscuridad de Drosophila larva. Este ensayo proporciona información acerca de la regulación circadiana innata y de la luz photobehavior detección y tratamiento.

Resumen

La luz actúa como señal ambiental para controlar el comportamiento de los animales en los distintos niveles. El sistema nervioso de Drosophila larval se utiliza como un modelo único para responder preguntas básicas sobre cómo se procesa y se comparte entre los comportamientos rápidos y circadiano información de la luz. Larvas de Drosophila mostrar una conducta de evitación estereotipo cuando se expone a la luz. Para investigar las conductas dependientes de la luz pruebas de preferencia de luz-oscuridad comparativamente simples que se pueden aplicar. En los vertebrados y artrópodos, los caminos de los nervios implicados en la detección y procesamiento de entradas visuales se superponen parcialmente con las de procesamiento de información fótica circadiano. El fascinante cuestión de cómo el sistema de detección de luz y el sistema circadiano interactúan para mantener las salidas de comportamiento coordinados sigue siendo en gran medida inexplorada. Drosophila es un modelo de impacto biológica de acercarse a estas preguntas, debido a un pequeño número de neuronas en el cerebro y la disponibilidad de herramientas genéticas para MANIPUL neuronalación. El ensayo de preferencia de luz-oscuridad presentado permite la investigación de una serie de comportamientos visuales, incluyendo control circadiano de phototaxis.

Introducción

Aquí se describe un ensayo de comportamiento basado en la preferencia larval para la oscuridad (o luz). Las larvas se reacciona con una respuesta fotonegativa fuerte y estereotipado durante las etapas de alimentación (L1 a L3 temprana) 1. El ensayo está destinado a evaluar el comportamiento fotofóbico de la larva y compara la preferencia claro u oscuro de un grupo de larvas mover libremente en una placa de Petri recubiertas con agar. Este ensayo de comportamiento no sólo proporciona información sobre la sensibilidad, la integración y temporal plasticidad del sistema visual, que proporciona más pistas sobre cómo sensibilidad a la luz y su proceso es control....

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Protocolo

1. Cría de larvas

  1. Mantenga volar cepas o cruces genéticos en la cultura de masas a 25 ° C en medio de harina de maíz bajo un 12 hr luz-ciclo de 12 horas de oscuridad en un fly Incubadora equipada con luz y temporizador.
  2. Diluir el respaldo de la levadura en agua para formar una pasta fluida (10 g de levadura respaldo diluido con 3-4 ml destilada H 2 O). Añadir una gota de la comida de harina de maíz y cubrir los viales. Deje secar durante al menos una hora para evitar las moscas adultas se pegue a la pasta de levadura. Poner una pequeña gota de levadura diluido en agua en la superficie de la comida puede mejorar la oviposición. Alternat....

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Resultados

Siguiendo el protocolo descrito anteriormente, hemos probado la preferencia de luz-oscuridad a principios del tercer estadio larval de tipo salvaje Canton-S vuela en dos tiempos circadianos diferentes CT0 y CT12. Los adultos fueron criados de 12 horas de luz-oscuridad de 12 horas y se fueron a poner huevos durante 12 horas. Las larvas crecen los dos primeros días bajo el mismo régimen de luz-oscuridad. Ya que queríamos probar la modulación circadiana en condiciones constantes (funcionamiento libre del reloj circadiano),.......

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Discusión

La prueba de preferencia luz descrita aprovecha la photobehavior innata larval. El ensayo es fácil de establecer, permite muchas repeticiones a bajo coste y ofrece información valiosa acerca de la detección de luz y de procesamiento. El paradigma experimental permite la cuantificación relativamente rápido de la cantidad de personas prefieren la luz o la oscuridad. Tal preferencia se puede mostrar como porcentajes de crudo o también como índice de preferencia (PREF). El PREF se expresa como la diferencia de los animales .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Agradecemos a nuestros colegas en el Departamento de Biología de la Universidad de Friburgo para un debate fructífero. Damos las gracias a la existencia de Centro Bloomington de proporcionar las poblaciones de moscas. Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencia de Suiza (PP00P3_123339) y la Fundación Velux para SGS

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
agarSigma-AldrichA5093-500G2,5%; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, Suiza
Placas de PetriGreiner Bio-One GmbH63318090 mm de diámetro; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Austria
Lámpara LEDOSARAM80012Lámpara LED blanca, 80012
Blanco Medidor de ambientePCEPCE EM882Lux, Temp, HR%
Armario termostáticoAqua Lytic (Liebherr)ET636-6
Temporizador de luzTemporizador T6185.104230V/50HZ (consulte las especificaciones de su país)
Universal termostatoConradUT200
HumidificadorBoneco
Cinta balckTesa5 cm
PegamentoUhu
lncubatorlámpara PhillipsSofttone5W
Reloj temporizadorZilissZiliss, Suiza
Excel SoftwareMicrosoftExcel
Origin Software 8.5OriginLab
Backer LevaduraMigros Suiza
Soporte de hierro 17X28CMFisher ScientificS47808
Ácido acéticoSigma AldrichA6283-100MLÁcido acético al 20% diluido en H2O Lámpara de
luz rojaPhillips PFE712E*8C
Espátula Fisher Scientific14-373-25A Fuente
alimentaciónEAEA PS 2042-06B
Opcional Papel de aluminioPrix
HeaterGOONNSB200C
Horno de microondasIntertronic
Harina de maíz estándar Alimento
Agua destilada
de Coop para moscas

Referencias

  1. Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development. J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).
  2. Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C.

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Etiquetas

Fotocomportamiento circadianoPrueba de preferencia luz oscuridadAn lisis de fototaxiaC lculo del ndice de preferenciaIncubaci n en oscuridad constanteIluminaci n con l mpara LEDClasificaci n larval por estadiosComportamiento fotof bico

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