El miofibroblastos es una célula estromal influyente del tracto gastrointestinal que regula importantes procesos fisiológicos en los estados tanto normales y de enfermedad. Se describe una técnica que permite el aislamiento de miofibroblastos primarios de ratón y tejido de colon humano, que puede ser utilizado para la experimentación in vitro.
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Artículo de método
Aislamiento de Miofibroblastos primarias de ratón y el tejido del colon humano
En este artículo
Resumen
Resumen
El miofibroblastos es una célula estromal del tracto gastrointestinal (GI) que ha ido ganando considerable atención por su papel crítico en muchas funciones gastrointestinales. Mientras que varias líneas celulares myofibroblast están disponibles comercialmente para estudiar estas células in vitro, los resultados de investigación desde una línea de células expuestas a condiciones experimentales de cultivo de células tienen limitaciones inherentes debido a la naturaleza excesivamente reduccionista de la obra. El uso de miofibroblastos primaria ofrece una gran ventaja en términos de confirmación de los hallazgos experimentales identificados en una línea celular. Aislamiento de miofibroblastos primarios a partir de un modelo animal permite el estudio de los miofibroblastos en condiciones que imitan más estrechamente se estudió el estado de enfermedad. Aislamiento de miofibroblastos primarios de tejido del colon humano ofrece sin duda los datos experimentales más relevantes, ya que las células vienen directamente de los pacientes con la enfermedad de base. Se describe una técnica bien establecida que puede ser utilized aislar miofibroblastos primarias de ratón y el tejido del colon humano. Estas células aisladas se han caracterizado a ser actina alfa del músculo liso y vimentina-positivo, y negativo-desmina, consistente con los miofibroblastos subepiteliales intestinales. Células miofibroblastos primarias se pueden cultivar en cultivo celular y se utilizan para fines experimentales más de un número limitado de pasajes.
Introducción
La regulación de la función del tracto gastrointestinal (GI), implica complejas interacciones dinámicas entre la capa de la mucosa y su mesénquima subyacente. Estas interacciones normalmente sirven para mantener la homeostasis, pero también puede conducir al desarrollo de enfermedades en condiciones patológicas 1. Los miofibroblastos son una subpoblación de células del estroma situado subyacente a la capa epitelial que se comunican de una manera paracrina y la zona subpoblaciones de células para regular una serie de procesos del tracto GI críticos que incluyen la regeneración de la mucosa, la reparación, y la fibrosis 2.
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Protocolo
1. Obtener el tejido del colon
Ratón
Un protocolo para llevar a cabo experimentos con animales, que detalla los fundamentos y objetivos de la investigación, fue presentado y aprobado por nuestra oficina institucional de Investigación Animal de Supervisión.
- La eutanasia del ratón con isoflurano inhalado seguido por dislocación cervical.
- Haga una incisión en la línea media ventral, retraer el intestino delgado de distancia e identificar el colon. Repliegue la vejiga y el útero (si existe) lateralmente e identificar el hueso púbico y cortar con tijeras finas para exponer el recto.
- Dise....
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Resultados
Una vez aislado, miofibroblastos humanas primarias se pueden cultivar en cultivo celular y se utilizan en un número limitado de pasajes (hasta el paso 4). Estas células se caracterizan por ser un suave-actina y vimentina positivo muscular, y desmina-negativo (Figura 1A), en consonancia con los miofibroblastos subepiteliales intestinales 5,7. También tienen una morfología estrellada característica (Figura 1B). Miofibroblastos primarias se pueden utilizar para confirmar los hal.......
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Discusión
La técnica general es similar cuando se utiliza el ratón o de colon humano. Esta técnica también se puede utilizar para aislar miofibroblastos en el intestino delgado. Los detalles específicos para el aislamiento de miofibroblastos de 1. ratón y 2. colon humano se discuten a continuación.
1. Ratón Colon
Irrigación del colon de ratón se facilita uniendo un 4 en, 16 G Popper aguja de extremo romo a un extremo del colon. Esto también ayuda al cortar el colon longitudin.......
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Divulgaciones
Los autores tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud Grant 5KO8DK085136-02 a JY.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios (opcional) |
| Dispasa I | Invitrogen/GIBCO | #17105-041 | |
| Colagenasa D | Roche | #1 088 858 | |
| 4 in, 16 G Aguja roma Popper | Fisher | #14-825-16K |
Referencias
- Armaka, M., et al. Mesenchymal cell targeting by TNF as a common pathogenic principle in chronic inflammatory joint and intestinal diseases. J. Exp. Med. 205, 331-337 (2008).
- Powell, D. W., et al. Paracrine cells important in healt....
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Reimpresiones y permisos
