Generación de nódulos linfáticos de grasa Pad quimeras para el Estudio del Ganglio Linfático estroma origen de célula

Cecile Benezech; Jorge H. Caamano

doi:10.3791/50952

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Artículo de método

Generación de nódulos linfáticos de grasa Pad quimeras para el Estudio del Ganglio Linfático estroma origen de célula

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DOI:

10.3791/50952

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16 de diciembre de 2013

Cecile Benezech¹^,² , Jorge H. Caamano¹

¹School of Immunity and Infection, IBR-MRC Centre for Immune Regulation, College of Medical and Dental Sciences, University of Birmingham, ²Centre for Cardiovascular Sciences, University of Edinburgh

En este artículo

Resumen

Se describe la generación de quimeras de ganglios linfáticos/almohadillas de grasa para el estudio del origen de las células estromales de los ganglios linfáticos. El método implica el aislamiento de ganglios linfáticos de ratones recién nacidos y almohadillas de grasa embrionaria, la generación de almohadillas quiméricas de grasa de ganglios linfáticos y su transferencia debajo de la cápsula renal de un ratón huésped.

Resumen

El estroma es un componente clave de la estructura y función de los ganglios linfáticos. Sin embargo, se sabe poco sobre su origen, composición celular exacta y los mecanismos que rigen su formación. Los ganglios linfáticos siempre están encapsulados en el tejido adiposo y recientemente hemos demostrado la importancia de esta relación para la formación del estroma ganglionar. Las células precursoras de los adipocitos migran al ganglio linfático durante su desarrollo y, al unirse al receptor de linfotoxina-b, desactivan la adipogénesis y se diferencian en células estromales linfoides (Bénézech et al.¹⁴). Con base en el potencial del estroma linfoide del tejido adiposo, presentamos un método que utiliza una quimera de ganglios linfáticos/almohadillas de grasa que permite el rastreo del linaje de los precursores de células estromales de los ganglios linfáticos. Mostramos cómo aislar los ganglios linfáticos recién nacidos y el tejido adiposo embrionario EYFP⁺ y hacer una quimera de almohadilla de grasa LN/EYFP⁺. Después de la transferencia debajo de la cápsula renal de un ratón huésped, el ganglio linfático incorpora células precursoras de tejido adiposo local y termina su formación. El análisis de la progenie de las células de la almohadilla grasa EYFP⁺ en los ganglios linfáticos resultantes se puede realizar mediante el análisis de citometría de flujo de los ganglios linfáticos digeridos enzimáticamente o mediante el análisis de inmunofluorescencia de las criosecciones de los ganglios linfáticos. Mediante el uso de almohadillas de grasa de diferentes modelos de ratones knockout, este método proporcionará una forma eficiente de analizar el origen de las diferentes poblaciones de células estromales de los ganglios linfáticos.

Introducción

Los ganglios linfáticos (LNs) son órganos clave del sistema inmune situados en sitios estratégicos del cuerpo, a lo largo de la red de vasculatura linfática. Permiten la filtración de antígenos y patógenos y proporcionan un sitio para la presentación de antígenos a los linfocitos y la inducción de respuestas inmunitarias adaptativas. El estroma, que forma la estructura básica de la LN y orquesta el movimiento de los diferentes participantes hematopoyéticos de la respuesta inmunitaria adaptativa, es fundamental para la función de estos órganos. Diferentes poblaciones de células estromales suministran señales esenciales y específicas para los movimientos, localización, ....