La vacunación profiláctica y terapéutica a menudo falla para estimular respuestas inmunes fuertes debido a la semana de drenaje de la vacuna a los ganglios linfáticos y en consecuencia pobres implicación de células inmunes. Por inyección directa de la vacuna a los ganglios linfáticos, así llamada inyección intralinfática, eficacia de la vacuna puede ser fuertemente mejorada y dosis de la vacuna se puede reducir.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Intralinfática inmunoterapia y vacunación en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Las vacunas se inyectan típicamente por vía subcutánea o intramuscular para la estimulación de respuestas inmunes. El éxito de este requiere un drenaje eficaz de la vacuna a los ganglios linfáticos donde las células presentadoras de antígeno pueden interactuar con linfocitos para la generación de las respuestas inmunes buscadas. La fuerza y el tipo de respuesta inmune inducida también dependen de la densidad o la frecuencia de las interacciones, así como el microambiente, especialmente el contenido de citoquinas. Como sólo una fracción de minuto de vacunas periféricamente inyectados llega a los ganglios linfáticos, las vacunaciones de ratones y seres humanos se realizaron por inyección directa de la vacuna en los ganglios linfáticos inguinales, es decir, la inyección intralinfática. En el hombre, el procedimiento es guiada por ultrasonido. En ratones, una pequeña incisión (5-10 mm) se realiza en la región inguinal de los animales anestesiados, el ganglio linfático se localiza y se inmoviliza con unas pinzas, y un volumen de 10-20 l de la vacuna se inyecta bajo control visual.La incisión se cierra con una única puntada utilizando suturas quirúrgicas. Los ratones fueron vacunados con el ADN plásmido, ARN, péptido, proteína, partículas, y bacterias, así como adyuvantes, y se observó una fuerte mejora de la respuesta inmune contra todo tipo de vacunas. El método intralinfática de la vacunación es especialmente apropiada en situaciones en las que la vacunación convencional produce inmunidad insuficiente, o cuando la cantidad de vacuna disponible es limitado.
Introducción
Las vacunas se inyectan típicamente por vía subcutánea o intramuscular para la estimulación de respuestas inmunes. El éxito de este procedimiento requiere un drenaje eficaz de la vacuna a los ganglios linfáticos donde las células presentadoras de antígeno pueden interactuar con linfocitos para la generación de T y las respuestas de células B. Además, la fuerza y el tipo de respuesta inmune inducida también dependen de la densidad o de la frecuencia de tales interacciones, así como el propio microambiente, especialmente el contenido de citoquinas. Como sólo una pequeña fracción de una vacuna se inyecta en un tejido periférico llega a un nodo de linfa, las vacunacion....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
1. Anestesia de ratones
- Preparar los anestésicos mediante la mezcla de ketamina (anestésico disociativo) y xilazina (sedante y analgésico) en solución salina. Las concentraciones de ketamina y xilazina en la solución final son 12.5 y 2 mg / ml, respectivamente.
- Inyectar los anestésicos a los ratones mediante administración intraperitoneal usando una jeringa con una aguja de calibre 25-30. Utilice 0,1 ml/10 g de peso corporal.
- Aplique una pomada oftálmica a los ojos de los ratones con el fin de evitar que se reseque de las córneas.
- Asegúrese de que el ratón esté suficientemente anestesiado pellizcando su pie o del pie con las p....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
El procedimiento de inyecciones intralinfáticas en ratones, a pesar de la cirugía, es sencillo y relativamente rápido. Una persona capacitada puede realizar el procedimiento en 3-4 min. La incisión que se cierra con una puntada típicamente se cura dentro de dos días (Figura 1)
Vacunación o inmunización intralinfática se ha realizado con ARNm, ADN plásmido, péptidos, proteínas, virus y bacterias. Figura 2 ilustra la producción de anticuerpos después de la inm.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La inmunización intralinfática e inmunoterapia han demostrado ser apropiados para la estimulación de las respuestas tanto de anticuerpos y respuestas de células T. Como se ha demostrado en este video-artículo, el procedimiento intralinfática de la vacunación es un método rápido y fácil para la estimulación de respuestas inmunes fuertes en ratones. Un cirujano entrenado puede realizar el procedimiento durante 3-4 min. En la sesión también se puede compartir entre dos cirujanos donde uno es típicamente haciendo la anestes.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
TMK es nombrado como inventor de patentes que tratan con inmunoterapia intralinfática en el hombre. TMK ha sido asesor científico y ha recibido los gastos de viaje desde ImVisioN GmbH, Cytos Biotecnología, MannKind Corporation, y XBiotech EE.UU. Inc. PJ no le interesa el conflicto de revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen la ayuda experimental en el desarrollo del método de inmunización intralinfática en ratones de Iris Erdmann, Barbara von Beust, y Julia María Martínez-Gómez. Gracias también a Maggy Arras y Nikola Cesarovic para dejarnos usar su teatro quirúrgico para esta producción de vídeo.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Ketamina (Ketasol-100) | Graeub AG, Suiza | Anestésicos | |
| Xilacina (Rompun) | Bayer, Alemania | Anestésicos | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Suiza | Para evitar que los ojos se sequen durante la anestesia. | |
| BD Micro-Fine 0,5 ml | BD Medical, Francia | Jeringas de insulina de 29 g con agujas fijas | |
| 6-0 Dermalon Monofilament Nylon | Covidien, MA, USA | Para suturas (0,7 métricas, 18 G, 45 cm, azul) | |
| Pinzas curvas, 4,5 en | Polymed, Suiza | Para incisión y sujeción de ganglios linfáticos | |
| Tijeras quirúrgicas rectas, 4,5 en | Polymed, Suiza | Para | |
| incisión Portaagujas, 5.5 en | Polymed, Suiza | Para cerrar la incisión con sutura |
Referencias
- Johansen, P., et al. Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity. Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).
- Maloy, K. J., et al. Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
Explorar más artículos
Inyección intralinfáticavacunación de ganglios linfáticosinmunización de ratonescierre mediante sutura quirúrgicaganglio linfático inguinalmétodos de administración de vacunasmedición de la respuesta inmunitariacomparación con la inyección subcutáneaensayo de producción de anticuerposrespuesta de células T citotóxicas
