La medida de resultado primaria en los ensayos clínicos de trastornos neuromusculares en general se mejoró la función muscular. Por lo tanto, la evaluación del efecto de los compuestos terapéuticos potenciales sobre el rendimiento muscular pre clínica en modelos de ratón es de gran importancia. Se describen varias pruebas funcionales para abordar esta cuestión.
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Artículo de método
Evaluación del desempeño funcional en el
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Resumen
Resumen
La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es un músculo severa y progresiva perder trastorno para el que no hay cura disponible. Sin embargo, varios compuestos farmacéuticos potenciales y estrategias de terapia génica han progresado en los ensayos clínicos. Con la mejora en la función muscular es el punto final lo más importante en estos ensayos, mucho énfasis se ha puesto en la creación de fiable, reproducible y fácil de realizar pruebas funcionales de comprobar la validez clínicamente evaluar la función muscular, la fuerza, la condición y la coordinación en la modelo de ratón mdx de la DMD. Ambas pruebas invasivas y no invasivas disponibles. Los exámenes que no agraven la enfermedad pueden ser usados para determinar la historia natural de la enfermedad y los efectos de las intervenciones terapéuticas (p. ej. Prueba de la fuerza de agarre de la extremidad anterior, dos pruebas que cuelgan diferentes utilizando ya sea un cable o una rejilla y rotarod ejecución). Alternativamente, forzada la cinta rodante puede ser utilizado para mejorar la progresión de la enfermedad y / o evaluarefectos protectores de las intervenciones terapéuticas en patología de la enfermedad. Se describen cómo realizar estas pruebas funcionales más utilizadas de una manera fiable y reproducible. El uso de estos protocolos basados en procedimientos operativos estándar permite la comparación de datos entre diferentes laboratorios.
Introducción
La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es la enfermedad neuromuscular más común que afecta a 1:5.000 varones recién nacidos. Esta enfermedad pérdida de masa muscular severa y progresiva es causada por mutaciones en el gen de la DMD que alteran el marco de lectura abierto y previenen la síntesis de la proteína distrofina funcional. Las fibras musculares que carecen de distrofina son vulnerables al daño inducido por el ejercicio. En caso de agotamiento de la capacidad de regeneración del músculo, y debido a la inflamación crónica del músculo dañado, fibras son reemplazadas por tejido conectivo y grasa, que posteriormente conducen a una pérdida de la función. ....
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Protocolo
Los experimentos descritos aquí fueron aprobados por el Comité de Ética Animal (DEC) del Centro Médico de la Universidad de Leiden (LUMC). Los ratones fueron criados por el animalario del LUMC y se mantienen en jaulas ventiladas individualmente con 12 ciclos de oscuridad luz hr. Tenían acceso ad libitum al agua y al pienso estándar.
Al realizar alguna de las pruebas funcionales se describen a continuación, las condiciones experimentales tienen que ser estrictamente controlada para reducir la variación. Preferiblemente, edad y sexo ratones emparejados deben utilizarse, como el rendimiento se diferencia entre la edad y sexos. Los r....
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Resultados
La fuerza de agarre de la extremidad anterior de tipo salvaje y ratones mdx aumenta entre la edad de 4-12 semanas y reduce de nuevo en ratones de más edad. Deficiencias en vigor ya se pueden observar en los ratones mdx jóvenes. Los datos representativos de 9 semanas de edad ratones hembra se muestran en las Figuras 1A y 1 B. Aunque la fatiga no difiere entre las cepas aún a esta edad, los ratones mdx son más débiles que los ratones de tipo salvaje. No tenemos .......
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Discusión
Las pruebas funcionales que se presentan aquí son reproducibles, fácil de realizar y aplicable a la de tipo salvaje y ratones distróficos con independencia de su edad. Las pruebas proporcionan herramientas útiles para pre clínicamente evaluar la función muscular, la fuerza, condición, y la coordinación. Al probar los efectos de un compuesto sobre la historia natural de la enfermedad, las pruebas no invasivas describen aquí (fuerza de agarre de la extremidad anterior, ambas pruebas colgantes y la prueba de rotarod) puede.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a Margriet Hulsker por su ayuda fotográfico y ayudar en la obtención de imágenes de los ratones y los revisores por sus comentarios muy constructivos. Este trabajo fue apoyado por ZonMw, TREAT-NMD (número de contrato LSHM-CT-2006 hasta 036.825) y el Proyecto de Padres de Duchenne.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Medidor de fuerza de agarre del ratón | Chatillon DFE (revendido por Columbus Instruments) | # 80529 | |
| Dispositivo de alambre para colgar 2 extremidades | Percha de tela o dispositivo | ||
| Dispositivo de alambre para colgar de 4 extremidades | Tapa de jaula para ratas o dispositivo | ||
| Rotarod | Ugo Basil | # 47600 | |
| Cinta de correr para ratones Exer 3/6 | Columbus Instruments | # 1055SRM |
Referencias
- Blake, D. J., Weir, A., Newey, S. E., Davies, K. E. Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle. Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).
- Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystroph....
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Reimpresiones y permisos
