Un ensayo de comportamiento simple para Pruebas de función visual en Xenopus laevis

Summary

Xenopus laevis renacuajos prefieren nadar en la parte blanca de un / tanque blanco negro. Este comportamiento es guiado por su visión. Sobre la base de este comportamiento, se presenta un ensayo simple para probar la función visual de los renacuajos.

Abstract

La medición de la función visual en los renacuajos de la rana Xenopus laevis, permite la detección de la ceguera en los animales vivos. La respuesta es un optocinético, comportamiento reflexivo basado en visión que se ha observado en todos los vertebrados examinados. Tadpole ojos son pequeños, así que utiliza la respuesta flip cola como medida alternativa, que requiere de un técnico capacitado para registrar la respuesta sutil. Hemos desarrollado un ensayo alternativo comportamiento basado en el hecho de que los renacuajos prefieren nadar en el lado blanco de un tanque cuando se coloca en un tanque con lados negros y blancos. El ensayo que aquí se presenta es una alternativa de bajo costo, simple que crea una respuesta que se mide fácilmente. La instalación consiste en un trípode, cámara web y tanques de prueba anidados, fácilmente disponible en la mayoría de los laboratorios de Xenopus. Este artículo incluye una película que muestra el comportamiento de los renacuajos, antes y después de cortar el nervio óptico. Con el fin de probar la función de uno de los ojos, también incluimos repreresultados representativos de un renacuajo en la que cada ojo se sometió a la axotomía de la retina en días consecutivos. Los estudios futuros podrían desarrollar una versión automatizada de este ensayo para probar la visión de muchos renacuajos a la vez.

Introduction

Xenopus laevis se han utilizado como un organismo modelo para estudiar la formación del ojo. Los ojos se desarrollan rápidamente, creciendo hacia la madurez en menos de una semana para los genes de prueba o vías que tienen un efecto sobre el desarrollo visual y la función. Para probar la función visual, la respuesta optocinético y optomotor se ha utilizado en el pez cebra y los renacuajos Xenopus, respectivamente ^1,2. Debido a que los ojos de los renacuajos Xenopus son relativamente más pequeño que el pez cebra, este ensayo requiere el uso de equipo especializado y personal entrenado para detectar el comportamiento sutil cola-fli....

Protocol

Cuidado de los Animales

La Xenopus laevis renacuajos utilizadas en este estudio fueron cultivados, criados y tratados de acuerdo con los procedimientos aprobados por el Upstate Medical University IACUC y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.

. 1 Configuración Pre-comportamiento: Los renacuajos

1. Obtener embriones de Xenopus fertilizados de una fuente disponible comercialmente o in vitro fertilizar oocitos, como se describió anteriormente ^6.
2. Coloque blástula a embriones en estadio de la placa neural a 18 ˚ C en 60 mm placas de Petri que c....

Results

Informes anteriores han demostrado que los renacuajos de Xenopus premetamórficas prefieren nadar en la parte blanca de un / tanque blanco negro y llamado a este ensayo, el fondo del ensayo preferencia de color ³ Hemos cambiado este ensayo con el fin de probar la función visual de uno de los ojos de los renacuajos en menos de una semana. De esta manera, sus ojos se pueden recoger para el examen histológico.

Mostramos aquí cómo la respuesta se debe a las señales visuales. E.......

Discussion

Se presenta aquí un sencillo ensayo de comportamiento guiado por visión que puede ser fácilmente realizado en menos de una semana por personal de laboratorio mínimamente entrenados. Mientras otros ensayos requieren equipo especializado y la experiencia en el comportamiento animal, este ensayo permite una prueba rápida para determinar la función visual. Otro ensayo de comportamiento, el ensayo de evitación de Visual, se ha desarrollado para determinar cómo el tectum contribuye a la percepción visual en Xenopus <.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tanque flexible de 1/2 galón con tapa	eNasco		SB19271M Tamaño: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
Cinta
negra Papel
Plato giratorio de inoculación grande	VWR	50809-022	Tamaño: Dia 114.3 x   H 76,2 mm (4 1/2  x  3")
Almohadilla interior Durasorb	VWR	82004-836	Tamaño: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Trípode		Varios
Cámara iSight o webcam	Apple	M8817LL/A	Bueno para renacuajos más grandes, pero los pequeños son difíciles de ver
Ordenador portátil	Apple/PC	Varios	Utilizamos un MacBook de 13", 2 GHz Intel Core 2 Duo con MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV videocámara handycam	SONY	DCR-HC42	Conectado por firewire a la computadora con un FireWire 400 alfa de 6 y 4 conductores
Estación Handycam	SONY	DCRA-C121	Se puede utilizar para conectar firewire a la cámara
Software QuickTime Player	Quicktime	versión 10.1
Aguja de 26 G (5/8" de longitud)	VWR	BD305115
Dumont #5 Pinzas	Fine Science Tools	11295-10
Desechables
Sulfato de gentamicina [50 mg/ml]	Fisher Scientific	17-528Z	Almacenado en RT
Sylgard 184 elastómero de silicona	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Doctors Foster and Smith	CD-116528	Solución madre = 100 g/L almacenado en RT
Fosfato de sodio dibásico	Sigma Aldrich	S0876	Solución madre = 0,4 M almacenado en RT
In vitro embriones fecundados	eNasco	LM00490MX	100 embriones/unidad