Los protocolos para la preparación eficaz de las muestras homogéneas de la araña roja, la infestación de plantas experimentales y la evaluación de daños en las plantas, como se requiere para los estudios de interacción planta-plaga se desarrollaron.
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Artículo de método
Aplicación de descubierto en dos de Spider Mite
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Resumen
Resumen
El ácaro de la araña de dos manchas, Tetranychus urticae, es un herbívoro artrópodos polífagas ubicuo que se alimenta de una notable amplia gama de especies, con más de 150 de valor económico. Es una de las principales plagas de los cultivos de invernadero, especialmente en las Solanáceas y Cucurbitáceas (por ejemplo, tomates, berenjenas, pimientos, pepinos, calabacín) y plantas ornamentales de invernadero (por ejemplo, rosas, crisantemos, claveles), cultivos extensivos anuales (como el maíz, el algodón, soja y remolacha azucarera), y en cultivos perennes (alfalfa, fresas, uvas, cítricos y ciruelas) 1,2. Además de la polifagia extrema que hace que sea una plaga agrícola importante, T. urticae tiene una tendencia a desarrollar resistencia a una amplia variedad de insecticidas y acaricidas que se utilizan para su control 3-7.
T. urticae es un organismo experimental excelente, ya que tiene un ciclo de vida rápido (7 días a 27 ° C)y puede ser fácilmente mantenido a alta densidad en el laboratorio. Métodos de ensayo de la expresión génica (incluyendo la hibridación in situ y tinción de anticuerpos) y para inactivar la expresión de genes endógenos de ácaros araña utilizando la interferencia de ARN se han desarrollado 8-10. Recientemente, toda la secuencia del genoma de T. urticae ha informado, creando una oportunidad para el desarrollo de este herbívoro plaga como organismo modelo con recursos genómicos equivalentes que ya existen en algunas de sus plantas hospederas (Arabidopsis thaliana y el Solanum lycopersicum tomate) 11. Juntos, estos organismos modelo podría ayudar a comprender las bases moleculares de las interacciones planta-plaga.
Aquí, un método eficiente para la recogida rápida y sencilla de un gran número de ácaros hembras adultas, su aplicación en un host de planta experimental, y la evaluación de los daños a las plantas debido a la alimentación del ácaro araña se describen. El protocolo presentado enables colección rápido y eficiente de los cientos de personas en cualquier etapa de desarrollo (huevos, larvas, ninfas, adultos machos, y las hembras) que se puede utilizar para la aplicación experimental posterior.
Introducción
Interacción planta-plaga es un tema de gran importancia científica y económica. Se estudió históricamente el uso de ambas plantas de cultivo (tales como el tomate) y el modelo de planta, A. thaliana. En ambos casos, la susceptibilidad de las plantas a los herbívoros se podía medir de forma directa a través de la evaluación del fenotipo de la planta después de un ataque de herbívoros o indirectamente a través de la evaluación del desempeño de plagas.
Las mediciones directas de susceptibilidad de las plantas se utilizaron previamente para un número de especies de plagas de insectos usando una gama de métodos. Por ejemplo, la herbiv....
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Protocolo
1. El mantenimiento de la araña roja Población
NOTA: Los ácaros son criados en California frijoles rojos (Phaseolus vulgaris).
- Cultiva plantas de frijol de semillas durante 2-3 semanas antes de la infestación.
- Intermix estas plantas con las plantas infestadas; ácaros adultos se colonizar rápidamente el material vegetal fresco.
- Retire las plantas de frijol infestados cada 7-10 días, reemplazándolos con plantas frescas.
2. Recopilación de la hembra adulta ácaros
- Mite colección utilizando el método de lavado
- Para recoger los ácaros, coloque una pla....
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Resultados
El uso de 20 a 30 plantas de frijol infestadas, se puede recolectar alrededor de 2.000 ácaros hembra adulta utilizando tamices. El tiempo requerido para infestar 10 plantas con 20 ácaros por planta es de aproximadamente 15 minutos si se utiliza un cepillo para transferir los ácaros. Las combinaciones de los métodos de recolección y de la aplicación se muestran en la Figura 2.
Este protocolo genera resultados reproducibles de daños en las plantas, lo que demuestra que los áca.......
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Discusión
Este video muestra los protocolos que se utilizan para aislar y para infestar las plantas con un gran número de ácaros hembras adultas. Aunque hemos presentado este protocolo utilizando A. thaliana, que puede ser utilizado para cualquier sistema de interacción ácaro araña planta-y en la actualidad se está aplicando con éxito también en plantas de tomate y de vid (Vitis vinifera). Los rendimientos de protocolo resultados reproducibles, lo que indica que los ácaros son recogidos de estado fisiológico com.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este proyecto fue financiado por el Gobierno de Canadá a través de Genome Canada y el Instituto de Genómica de Ontario (OGI-046), y el Fondo de Investigación de Ontario-Liderazgo Global en Genómica y Ciencias de la Vida GL2-01-035 (a M.G. y V.G.). T.V.L. es becario postdoctoral del Fondo para la Investigación Científica de Flandes (FWO).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Material vegetal: | |||
| Frijol rojo de California | Stokes, Thorold, ON, Canadá | de 2 semanas de edad, bien infestado de ácaros 2 o 3 días antes de su uso. Se pueden utilizar otros cultivares de Phaseolus vulgaris. | |
| Productos químicos: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | 1% solución madre está preparada para simplificar la alícuota |
| Agua | A temperatura ambiente, el choque térmico y frío afecta la tasa de supervivencia y el rendimiento de los ácaros | ||
| Otros materiales y equipos: | |||
| Bandeja de plástico | |||
| de tijeras | |||
| Vasos de precipitados | |||
| L Toallas de | |||
| Juegos de tamices | Fabricación propia | Instrucciones detalladas disponibles | |
| Cepillo | |||
| Pipetas Puntas | |||
| pipeta | de 0,2 y 1 ml | ||
| Tubos de centrífuga de 1,5 ml | |||
| Bomba de | Bomba tipo acuario con caudal de aire invertido. Se puede utilizar una línea de vacío. La caída de presión requerida es de aprox. 2-4 psi | ||
| Escáner estereoscópico | |||
| Epson | V30 | Cualquier escáner de superficie plana que permita el grado necesario de control sobre la calidad del escaneo. Usamos Epson V30 para nuestros experimentos. | |
| Computadora | con Windows o OS X PC que sea compatible con el hardware del escáner y el software Adobe Photoshop. | ||
| Software de Adobe Photoshop | Adobe Systems Inc., San José, CA, EE. UU | . Varios Cualquier versión con la herramienta de histograma incluida. |
Referencias
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Van....
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Reimpresiones y permisos
