La exposición de la sangre a los conductos sanguíneos poliméricos inicia la reacción al cuerpo extraño que se ha implicado en las complicaciones clínicas. Aquí, se describe el Aparato de Bucle de Chandler, una herramienta experimental que imita la perfusión de sangre a través de estos conductos. El apéndice de CD47 recombinante da como resultado una disminución de la evidencia de la reacción de cuerpo extraño en estos conductos.
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Artículo de método
El uso de la Ex Vivo Aparato Chandler Loop para evaluar la biocompatibilidad de los conductos sanguíneos poliméricos modificados
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Resumen
Resumen
La reacción de cuerpo extraño se produce cuando una superficie sintética se introduce en el cuerpo. Se caracteriza por la adsorción de proteínas de la sangre y la posterior unión y activación de las plaquetas, monocitos / macrófagos de adhesión, y los eventos de señalización celular inflamatorios, dando lugar a complicaciones post-procedimiento. El Aparato Chandler Loop es un sistema experimental que permite a los investigadores estudiar las interacciones moleculares y celulares que se producen cuando grandes volúmenes de sangre son perfundidos sobre conductos poliméricos. Para ello, este aparato ha sido usado como un modelo ex vivo permite la evaluación de las propiedades anti-inflamatorias de diversas modificaciones superficie del polímero. Nuestro laboratorio ha demostrado que los conductos sanguíneos, modificados covalentemente a través de la química fotoactivación con CD47 recombinante, pueden conferir biocompatibilidad a superficies poliméricas. Al añadir CD47 a las superficies poliméricas podría ser un medio eficaz para promover la eficacia de los conductos sanguíneos poliméricos. Suein es la metodología que detalla la química de fotoactivación usado para anexar CD47 recombinante a los conductos sanguíneos poliméricos clínicamente relevantes y el uso de la Chandler Loop como modelo experimental ex vivo para examinar las interacciones de la sangre con las CD47 modificado y de control de conductos.
Introducción
Muchos procedimientos clínicos, tales como el bypass cardiopulmonar y la diálisis renal, requieren el uso de conductos de sangre poliméricos y, a menudo están asociados con complicaciones post-procedimiento 1. Cuando perfundido con sangre, estos polímeros ilícito reacción a cuerpo extraño (FBR), que resulta en la adsorción de las proteínas y plaquetas de la sangre, la adhesión de monocitos / macrófagos, y la liberación de citoquinas pro-inflamatorias, todos los cuales contribuyen a complicaciones post-procedimiento y / o 2,3 fallo del dispositivo. Por lo tanto, las estrategias para hacer frente a este problema siguen siendo un área importante de....
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Protocolo
1. modificación polimérico Superficies con recCD47
NOTA:. El protocolo se resume esquemáticamente en la Figura 1 La Figura 1A ilustra la generación de superficies poliméricos reactivos con tiol Figura 1B ilustra la generación de recCD47 reactivo con tiol..
- Día 1
- Preparar una solución de PDT-BzPh (1 mg / ml) y bicarbonato de potasio (KHCO3) (0,7 mg / ml) en agua estéril. Revuelva la noche a 4 ° C (protegerlo de la luz).
- Día 2
- Cortar tubo polimérico en 40 cm piezas largas (suficiente largo para caber alrededor de las ruedas giratorias).
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Resultados
Generación de superficies poliméricos reactivos con tiol mediante el uso de la TFD-BzPh y TCEP junto con reactivo con tiol recCD47 poli-lisina usando SMCC permite la fijación de recCD47 a las superficies poliméricas. El proceso de modificación se resume esquemáticamente en la Figura 1. La conveniencia de este proceso de modificación es que se puede aplicar a muchas proteínas diferentes y muchas superficies poliméricas diferentes, suponiendo que la proteína puede modificarse con grupos químicamente react.......
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Discusión
La química de fotoactivación (que se resumen en la Figura 1) permite la modificación de prácticamente cualquier superficie de polímero que tiene hidrocarburos suficientes para facilitar PDT-BzPh unión y la posterior irradiación UV para la foto-activar el PDT-BzPh. Funcionalización de la superficie polimérica con grupos tiol reactivos permite la posterior unión de una serie de moléculas de interés comprobables. En nuestros estudios particulares elegimos recombinante CD47 11-13. La química de c.......
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Divulgaciones
Las investigaciones realizadas en esta publicación fue apoyada por el Instituto Nacional de Imágenes Biomédicas y Bioingeniería, con el número de adjudicación R21 EB015612 (SSJ), y el Instituto Nacional del Corazón, los Pulmones y la Sangre, con el número de adjudicación T32 HL007915 (JBS y RJL), de la Nacional Instituto de Salud.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 16% Paraformaldehído (PFA) | Thermo Scientific | 58906 | ¡Atención! Uso en campana extractora |
| 25% Glutaraldehído | VWR | AAA17876-AP | ¡cautela! Uso en campana |
| extractora 2-piriditio,benzofenona (PDT-BzPH) | Sintetizado en laboratorio | N/A | |
| (BSA) | Sigma | A3059-100G | |
| Citrato | Sigma | S5770-50ML | |
| Cámara digital | Leica | DC500 | Fuera de producción |
| Dimetilformamida (DMF) | Sigma | 270547-100ML | ¡Precaución! Uso en campana extractora |
| Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (DPBS) | Gibco/Life Technologies | 14190-136 | |
| Microscopio fluorescente | Nikon | TE300 | |
| Ácido acético glacial | Fisher Scientific | A38-212 | ¡Precaución! Uso en campana extractora |
| Human CD47 (B6H12) – FITC Anticuerpo | Santa Cruz Biotechnology | SC-12730 | |
| Tetróxido de osmio | Acros Organics | 197450050 | ¡Precaución! Uso en campana extractora |
| Bicarbonato de potasio (KHCO3) | Sigma | 237205-100G | |
| Fosfato de potasio monobásico (KH2PO4) | Sigma | P5655-100G | |
| Tubo de PVC (kit de procedimiento cardiovascular) | Terumo Cardiovascular Systems | 60050 | La mayoría de los tubos de grado clínico funcionarán |
| Electrónica de barrido Microscopio | JEOL | JSM-T330A | |
| Cloruro de sodio (NaCl) | Fisher Scientific | BP358-212 | |
| Lector de microplacas | Molecular Devices | Spectramax Gemini EM | |
| Sulfo-SMCC | Sigma | M6035-10MG | ¡Sensible a la humedad! |
| tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP-HCl) | Thermo Scientific | 20491 | |
| Tween-20 | Bio-Rad | 170-6531 | |
| Vectashield con DAPI | Fisher Scientific | H-1200 | Sensible a la luz! |
| Columnas de desalinización Zeba Spin – 7 K MWCO | Thermo Scientific | 89891 |
Referencias
- Bruck, S. D. Medical applications of polymeric materials. Med. Prog. Technol. 9 (1), 1-16 (1982).
- Anderson, J. M., Rodriguez, A., Chang, D. T. Foreign body reaction to biomaterials. Semin. Immunol. 20 (2), 86-100 (2008).
- Levy, J. H., Tanaka, K. A.
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Reimpresiones y permisos
