Preparación de una Cultura de pellets de sangre para Rapid bacteriana Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los antibióticos

Resumen

Una preparación rápida sedimento bacteriano de un cultivo de sangre positivo puede ser utilizado como una muestra para aplicaciones tales como la identificación por MALDI-TOF, la tinción de Gram, la prueba de susceptibilidad a los antibióticos y prueba basada en PCR. Los resultados pueden ser comunicados rápidamente a los médicos a mejorar el resultado de pacientes que sufren de infecciones del torrente sanguíneo.

Resumen

Infecciones del torrente sanguíneo y sepsis son una causa importante de morbilidad y mortalidad. El resultado exitoso de los pacientes que sufren de bacteremia depende de una rápida identificación del agente infeccioso para guiar el tratamiento antibiótico óptimo. El análisis de la tinción de Gram de hemocultivo positivo puede llevar a cabo con rapidez y ya afecta significativamente el régimen de antibióticos. Sin embargo, todavía se requiere la identificación precisa del agente infeccioso para establecer el tratamiento óptimo de destino. Se presenta aquí una preparación sedimento bacteriano simple y rápido de un cultivo de sangre positivo que puede ser utilizado como una muestra para varias aplicaciones posteriores esenciales tales como la identificación por MALDI-TOF MS, las pruebas de sensibilidad a los antibióticos (AST) por ensayo de difusión en disco o sistemas automatizados de AST y por PCR automatizado basado en pruebas de diagnóstico. El rendimiento de estos diferentes sistemas de identificación y AST aplicados directamente sobre los sedimentos bacterianos de cultivo de sangre es muy SIMilar con el rendimiento que se obtiene normalmente a partir de colonias aisladas cultivadas en placas de agar. En comparación con los métodos convencionales, la rápida adquisición de un sedimento bacteriano se reduce significativamente el tiempo para reportar tanto la identificación y AST. Así, siguiendo la positividad del cultivo de sangre, identificación por MALDI-TOF puede ser reportado en menos de 1 hora mientras que los resultados de AST por sistemas automatizados AST o ensayos de difusión en disco dentro de 8 a 18 horas, respectivamente. Del mismo modo, los resultados de un ensayo rápido basado en la PCR se pueden comunicar a los médicos a menos de 2 horas tras el informe de una bacteriemia. Juntos, estos resultados demuestran que la rápida preparación de un sedimento bacteriano cultivo de sangre tiene un impacto significativo en el tiempo de identificación y de respuesta AST y por tanto en el resultado exitoso de pacientes que sufren de infecciones del torrente sanguíneo.

Introducción

Infecciones del torrente sanguíneo y la sepsis en pacientes hospitalizados son una causa importante de morbilidad y mortalidad. Por lo tanto, se observa la mortalidad relacionada con infecciones del torrente sanguíneo en aproximadamente 14% a 37% de los pacientes hospitalizados y puede aumentar hasta el 35% en las unidades de cuidados intensivos de los pacientes ^1-3. La identificación rápida del agente infeccioso es fundamental para orientar el tratamiento antimicrobiano óptimo y para aumentar el éxito de la terapia antimicrobiana ^4,5. El rápido análisis de la tinción de Gram de hemocultivo positivo ya tiene un impacto significativo en la adapta....

Protocolo

Este protocolo ha sido desarrollado y validado después de los procesos de investigación y desarrollo y las normas éticas de nuestra institución antes de ser implementado como una herramienta rutinaria.

1 Preparación de un cultivo de sangre bacteriana Pellet por Amonio Procedimiento Cloruro de eritrocitos-lisis

1. Preparación de una cultura positiva de sangre para su posterior centrifugación.
   1. Esterilizar la tapa hemocultivo. Añadir 70% de etanol en la tapa de la botella y quemarlo.
      NOTA: No realice este paso en una campana de flujo laminar.
   2. Mover la botella a una campana de flujo laminar. Recoger 5 ml del ....

Resultados

En el estudio realizado por Prod'hom et al. ^15, sedimentos bacterianos obtenidos por cloruro de amonio lisis centrifugación de 122 hemocultivo positivo de 78 pacientes se analizaron por MALDI-TOF MS. Fuera de 122 hemocultivos positivos, 95 (77,9%) fueron correctamente identificados a nivel de especie y uno (0,8%) a nivel de género. Los 26 (21,3%) Bolitas de hemocultivo restantes no dieron ninguna identificación fiable por MALDI-TOF. Entre ellos, 21 eran bacterias gram positivas incluyendo 13 estrepto.......

Discusión

En comparación con los métodos de diagnóstico de hemocultivos positivos convencionales, la rápida adquisición de un sedimento bacteriano utilizando el cloruro de enfoque centrifugación lisis de amonio a reducir el tiempo para informar de identificación en un 16 a 24 horas y el tiempo de reportar AST por 24 a 48 horas (Figuras 1 y 3).

Rápida introducción de la terapia antibiótica adecuada es fundamental para mejorar el pronóstico de los pacientes que sufren de infecciones del.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja de 20 g	Terumo, Lovaina, Bélgica	NN-2038R
50 ml Tubo Falcon	BD, Franklin Lakes, NJ, EE. UU	352070	Tubos de centrífuga de 50 ml Cloruro de
amonio	Merck, Darmstadt, Alemania	101145
Carbonato de hidrógeno de potasio	Fluka, St. Louis, MO, EE. UU.	60340
Ácido fórmico	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.	F0507	Inflamable, corrosivo
α-Ácido ciano-4-hidroxicinámico	Fluka, St. Louis, MO, EE. UU.	70990	Toxicidad aguda
Acetonitrilo	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.	271004	Inflamable, toxicidad aguda
Ácido trifluoroacético	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.	T6508	Corrosivo, toxicidad aguda
Vitek 2 60 instrumento	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	27202	instrumento de sistema microbiano automatizado
Vitek 2 tarjeta Gram-positivo (GP)	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	21342	tarjeta de identificación GP  automatizada
Vitek 2 tarjeta AST-P580	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	22233	sistema AST microbiano automatizado
Vitek 2 tarjeta Gram-negativo (GN)	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	21341	tarjeta de identificación GN
automatizada Vitek 2 tarjeta AST-N242	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	413391	sistema AST microbiano automatizado
Xpert MRSA	Cepheid, Sunnyvale, Ca, EE. UU	.   GXMRSA-100N-10 tecnología de	amplificación de ácidos nucleicos MRSA
Instrumento GeneXpert IV	Cepheid, Sunnyvale, CA, EE. UU.	Instrumento de tecnología de amplificación de ácidos nucleicos	GXIV-4-D
Instrumento Microflex LT MALDI-TOF MS Bruker	Daltonics, Bremen, Alemania	BDAL microflex LT/SH
MSP 96 acero objetivo BC	Bruker Daltonics, Bremen, Alemania	280799	Placa de objetivo MALDI
Densitómetro Instrumento Densicheck	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	27208
MALDI Sepsityper kit 50	Bruker Daltonics, Bremen, Alemania	8270170
Mac Conkey agar	Biolife, Milán, Italia	4016702
Agar Mueller-Hinton	Oxoid, Hampshire, Inglaterra	CM0337	Agar Mueller-Hinton (MH)
Agar MHF	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	43901	Agar Mueller-Hinton agar organismos fastidiosos (MHF)
BD Agar Columbia III	BD, Franklin Lakes, NJ, EE. UU.	254071	agar sangre
BD agar chocolate	BD, Franklin Lakes, NJ, EE. UU.	254089	agar chocolate
BD Agar Schaedler	BD, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE. UU	254084	Agar Schaedler

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