Una instalación de pez cebra adecuada para la cría y la investigación in vivo se construye de manera fácil y asequible. El mantenimiento es mínimo. Esta instalación es ideal para la participación de los estudiantes y la investigación independiente.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Construcción de un Build-Fácil-Fondo de pez cebra asequible y
En este artículo
Resumen
Resumen
En vivo la investigación biomédica es fundamental para traducir en hallazgos in vitro a los avances clínicos. Instituciones académicas pequeñas con recursos limitados les resulta prácticamente imposible construir y mantener instalaciones de roedores típicos para la investigación. El pez cebra investigación ha demostrado ser una alternativa valiosa para la investigación in vivo en farmacología, la fisiología, el desarrollo y los estudios genéticos. En este artículo se demuestra que una instalación de pez cebra funcional puede construirse de una manera fácil y asequible. Demostramos que una instalación de este tipo podría ser construido en alrededor de un día de trabajo con un mínimo de herramientas y conocimientos. El costo de la instalación de pez cebra pecera 27 1.8 L construido en este estudio fue de aproximadamente $ 1,500. Estimamos que el mantenimiento de una colonia inicial peces de trabajo 150 por 3 meses es de $ 1.000. Este proyecto consistió en los estudiantes, que se introdujeron a la acuacultura del pez cebra para la investigación propone.
Introducción
En modelos in vivo son esenciales en la realización de la investigación biomédica integral, ya que permiten la investigación in vitro para ser traducido a nivel del sistema y del organismo. Por ejemplo, la investigación con mamíferos pequeños, es decir, los roedores, se ha demostrado necesaria en el desarrollo de fármacos y en la mejora de los medicamentos disponibles. Sin embargo, la complejidad (financiero y logístico) podría hacer que sea prácticamente imposible construir y mantener instalaciones de roedores de experimentación propone en pequeñas instituciones académicas de investigación. Sin embargo, la investigación in vivo se puede realizar utilizando otras especies de animales que requieren la logística menos elaboradas. El pez cebra (Danio rerio) se han utilizado con éxito como un modelo in vivo para estudiar la genética, el desarrollo, fisiopatología, y 1,2,10,11,12 farmacología. Las instalaciones necesarias para albergar el pez cebra para la experimentación son relativamente simples y significativamente menos costoso en comparación con rinstalaciones Odent. Kim et al. 3 han descrito recientemente con detalle un sistema de vivienda pez cebra 80 del tanque que se puede construir por aproximadamente $ 1.500, que incluye las piezas y la mano de obra. Esto está en marcado contraste con los casi $ 8.500 que serían necesarios para comprar un sistema de 80 tanque de ready-made de cualquier número de proveedores comerciales. Sin embargo, la descripción dada por Kim et al. puede ser complicado y difícil de seguir para los novatos de la investigación de pescado. Creemos que una instalación de pez cebra se puede construir de manera simplificada para una inversión de $ 1.500.
El establecimiento de una instalación en vivo a las pequeñas instituciones académicas ofrece sus facultades una herramienta adicional con la que producir investigación más potente y completa. Los datos in vitro apoyados por resultados in vivo generalmente producen la investigación biomédica más completo que los datos obtenidos utilizando sólo en enfoques in vitro. Por lo tanto, laimplementación de un centro de investigación in vivo mejorará significativamente el éxito institución en sus esfuerzos globales de investigación (exposición de los estudiantes a la investigación, publicaciones, comunicaciones, búsqueda de financiación externa, etc.).
La construcción de una instalación de pez cebra como el que se describe en este estudio es ideal para las instituciones académicas de investigación con instalaciones limitadas (o instituciones sin in vivo instalaciones de investigación) durante la constricción de tiempos financieros.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
NOTA: Estos protocolos siguen las directrices del IACUC de Presbyterian College.
1. Materiales Adquirir En la Tabla 1.
2. Montar el 5 Shelf Chrome Según las instrucciones del fabricante. Esto será utilizado para albergar el Mecanismo.
3. Construir el depósito de agua y sistema de filtración (Figuras 1A y 2).
- Utilizando la figura 1A como guía, Esquemas de los 18 galones cubo, bomba, filtros y lámpara UV para determinar la ubicación de la instalación final y el tamaño.
- Una vez que las partes están dispuestas, medir y cortar el "tubo de PVC de ¾ de la longitud necesaria para el montaje. Varíe las longitudes de todas las tuberías de acuerdo a las necesidades y limitaciones de espacio específicos.
- Montar los tubos y accesorios según lo establecido previamente usando el cebador de PVC y cemento, véase más adelante (3.3.2 y 3.3.3).
- Lija los bordes de corte de la tubería con papel de lija hasta que estén suaves al tacto unad no hay escombros.
- Primer el exterior de la tubería y el interior de la conexión con el cebador PVC comprado con el bastoncillo incluido desde el cebador PVC.
- Cemente la tubería y el accesorio juntos mediante la aplicación del cemento de PVC en el exterior de la tubería usando el hisopo incluido. Repita para todos los pasos que se necesitan cementación PVC.
- Coloque el cubo de 18 litros a un lado de la construcción estante.
- Instalar un conector de cierre en el lado del tanque de depósito.
- Adjuntar un "tubo de PVC de ¾ al mamparo.
- Conecte el otro extremo del ¾ "tubo a la entrada de la bomba usando un ¾" rosca hacer apropiado.
- Conecte los filtros a la bomba utilizando dos codos de 90 grados y ¾ "tubo de PVC.
- Utilice un filtro de papel seguido de uno filtros de carbón activado con el fin de filtrar los desechos y reducir los niveles de cloro y químicas en el agua.
- Conecte la lámpara UV a la filtros according a las instrucciones del fabricante.
- Coloque la bomba y el sistema de filtro a la parte superior de la primera plataforma de bastidor con lazos de alambre. Variar el orden del montaje y fijación según el tamaño y el diseño de la plataforma / estante elegido.
- Añadir 1 bio-bolas por galón de agua al depósito de agua una vez que la bomba y el sistema de filtro se montan y se conectan a la plataforma.
4. Construir la línea principal de suministro (Figuras 1B y 2).
- Mida y corte un pedazo de ¾ "tubo de PVC para conectar la lámpara UV para el suministro principal
- Use un ¾ "PVC tee iniciar la línea de alimentación principal conectando el tee hasta el ¾" escape de PVC procedente del filtro UV. .
- Añadir una válvula on-off a la parte inferior de la T de PVC para servir como un drenaje para el lavado de mantenimiento del sistema.
- Iniciar la línea de alimentación principal de la parte superior de la ¾ "PVC tee mediante la medición y corte de ¾" de PVCtubo a la longitud deseada para proporcionar tubos de alimentación para cada uno de los estantes en el bastidor.
- Instale ¾ "tees de PVC para las líneas horizontales que entrarán cada estante del bastidor.
- Opcionalmente (y sugerido), añadir un ¾ "on-off de la válvula para cada línea de suministro de plataforma para permitir el aislamiento de cada estante y un diseño modular del sistema.
- Use un "tubo de PVC de ¾ como una reducción de presión de línea en el estante superior. Si esta línea se ejecuta en la parte posterior de la plataforma, utilice este estante para el almacenamiento. Poner fin a la reducción de presión de línea en la línea de escape principal (Figura 1B) con un ¾ "válvula de cierre.
- Una vez que los pasos anteriores se han completado, el primer y cementar la tubería de PVC juntos como hecho previamente en la construcción del sistema de presas y filtración.
5. Construir la línea principal de escape (figuras 1C y 2).
- Ejecutar la longitud vertical de la línea principal de escape hacia el otro lado de la cremallera fesde la línea de alimentación principal. Use un tubo de PVC de 2 "para esta línea vertical para recibir la línea de alimentación principal en las líneas superior y drenaje de los tanques de peces de cada estante.
- Cortar las piezas de 2 "cañería de PVC para la línea principal de escape vertical y utilizar PVC de 2" tees para recibir las líneas de drenaje del tanque de peces de cada estante. Poner fin a la línea principal de escape en el tanque de almacenamiento para expulsar el agua reciclada a través de un filtro de esponja.
- Cortar una apertura de toda la longitud de los 2 "piezas de tubería de PVC de una pulgada y adjuntar a la línea principal de escape vertical con PVC camisetas para el líneas de drenaje horizontales de los tanques de peces.
- Tape los 2 "líneas de drenaje horizontales con un 2" tapa de PVC.
- Primer y cimentar las piezas con los accesorios necesarios (conectores, pezones o codos).
6. Construir los tanques de peces (Figura 3).
- Con el taladro, corte un "agujero en la parte posterior de la pecera 1" 1 1/8 por debajo del borde superior con una sierra de perforación.
- deslizar un ¾ "adaptador de PVC roscado macho (con un anillo de # 18 O adjunto) a través del orificio (desde el interior del tanque para el exterior).
- Coloque y apriete una de 90 grados 3/4 "rosca codo PVC al adaptador masculino para crear el tubo de escape pecera. Añadir un pedazo de malla fina antes de atornillar la tuerca de retención para evitar que el pez cebra a través del sistema de escape.
- Coloque el tanque de peces con su final del tubo de escape en el espacio abierto de la línea de drenaje detrás de los tanques
7. Arranque del sistema de agua
- En varios recipientes, tales como el utilizado para el depósito, medir tres veces la cantidad de agua contenida dentro del sistema. Dejar reposar esta agua a temperatura ambiente durante acondicionado durante 48 horas.
- Añadir agua al sistema y deje que circule durante un mínimo de 3 días.
- Cambiar el agua en el sistema vigorosamente durante los 3 primeros días de la circulación con el fin de eliminar el sistema de contaminantes That residen dentro de las tuberías.
- Añadir pez cebra de arranque y permitir que el ciclo del nitrógeno para establecerse. Normalizar el pH a un constante 7. Mantenga siete pez cebra por 1.8 L, y darles de comer dos veces al día durante los días de la semana y una vez al día durante los fines de semana como sugiere Linbo 4 y 6 McNabb.
- Supervisar el nitrato (<75 mg / L), nitritos (<10 mg / L) y amonio (0 mg / L) al día durante la primera semana después de la adición de los peces, y los niveles de dos veces por semana, una vez deseados se han mantenido con los cambios regulares de agua .
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
La construcción del sistema de bomba y fltros
Una vez que el bastidor está montado y configurado el primer paso es construir el sistema de la bomba y el filtro. Los filtros están conectados a la bomba del sistema y se encuentran por encima del nivel inferior de la primera plataforma, lo que permite el mantenimiento del filtro fácil y reemplazo. Del mismo modo, la lámpara UV está conectada con tubo de PVC para el filtro y sujeta con lazos de alambre de plástico para permitir la fácil sustitución de la lámpa...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
El propósito principal de este artículo es demostrar que la construcción de una instalación de pez cebra funcional no es complicado y puede ser construido por investigadores noveles peces con un mínimo conocimiento de la construcción. Además, este artículo muestra que los materiales de este centro de pez cebra funcional se pueden adquirir fácilmente y asequible de las tiendas de mascotas locales o ferreterías. Una vez que todos los materiales y herramientas que se hayan adquirido la construcción del sistema y los tanque...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflictos de interés por este papel.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a la Oficina de Investigación de la Facultad de Farmacia de la Escuela Presbiteriana de apoyo financiero de este proyecto a través de los Premios de la pequeña farmacia para la Investigación y Colaboración (SPARC) Premio. Los autores agradecen al Sr. John Smink, director del Laboratorio de Investigación de Animales Acuáticos de la Universidad de Clemson, Clemson, Carolina del Sur por su técnica de revisión de asistencia manuscrito.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Artículo | Marca | Cantidad | |
| 74 pulgadas de alto x 48 pulgadas de ancho x 18 pulgadas de profundidad Unidad de estantería independiente de acero de 5 estantes | Selecciones de estilo 1 | ||
| Cubo general/bolsa de 18 galones | Centrex Plastics: LLC Bolsa resistente | 1 | |
| regleta de enchufes de 6 tomacorrientes con cable de 15 pies, | maestro electricista | 1 | |
| agua UV de 9 vatios, clarificador de jardín FiIter y lámpara UV | Smartpond | ||
| Filtro de reemplazo de agua para toda la casa | Whirlpool | 6 | |
| Carcasa opaca de prefiltración para toda la casa | Whirlpool | 2 | |
| hilos | William H Harvey | 1 | |
| de cemento de PVC LO-VOC de 8 onzas | |||
| imprimación LO-VOC de 8 onzas líquidas | Oatey | ||
| Tubería de distribución de riego por goteo de vinilo de 1 1/4 pulgadas x 100 pies | Mister Landscaper | ||
| Válvula de encendido/apagado de riego por goteo con púas de 1 1/4 pulgadas | Mister Landscaper | 33 | |
| Colector de riego NPT de 9 puertos con filtro | Mister Landscaper | 6 | |
| Filtro Drop-In con Casa | Whirlpool | 6 | |
| Codo de PVC de 2 pulgadas de diámetro y 90 grados | LASCO | 3 | |
| T de 2 pulgadas de diámetro y 90 grados | LASCO | ||
| 3/4 pulgadas de diámetro y 90 grados | LASCO | 15 | |
| 3/4 pulgadas de diámetro Adaptador de PVC | LASCO | 7 | |
| /4 pulgadas de diámetro | LASCO | 12 | |
| Tapa de PVC de 2 pulgadas de diámetro | LASCO | 3 | |
| Adaptador de PVC de 1 pulgada de diámetro x 3/4 pulgadas | LASCO | ||
| 3/4 pulgadas con zócalo de PVC Válvula | americana Adaptador | ||
| 1/2 pulgadas de diámetro x 3/4 | Lasco | ||
| 3/4 pulgadas de diámetro | Lasco | 1 | |
| tubería de PVC de 2 pulgadas x 5 pies | Charlotte Pipe | ||
| ¾-In x 10 pies Tubería de PVC | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 anillo de PVC | SXT | 10 | |
| ½ ” Adaptador macho de PVC | SXT | 1 | |
| ¾ ” Acoplamiento de PVC | SXT | 1 | |
| y frac12; ” Adaptador hembra de PVC | SXT | 1 | |
| enlace | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾ ” Adaptador macho de PVC (con junta tórica # 18) | SXT | 28 | |
| 90 grados y frac34; ” codo roscado de PVC | SXT | 27 | |
| Malla fina | N/A | 1 yarda | |
| Conector de mamparo | N/A | 1 | |
| Sierra para metales | N/A | 1 | |
| Taladro | N/A | 1 | |
| Sierra de corona | N/A | 1 | |
| Llave ajustable | N/A | 1 | |
| Alicates | N/A | 1 | |
| Cinta métrica | N/A | 1 | |
| Gafas de seguridad | N/A | 1 | |
| Guantes de trabajo | N/A | 1 |
Referencias
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
