Ver y acceder al embrión de pollo durante el desarrollo puede ser un desafío. Hemos desarrollado un método ex ovo que es simple, rentable y se puede usar fácilmente en un aula o en un entorno de investigación. Este método proporciona acceso al embrión en etapas tardías del desarrollo embrionario (HH 40).
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Artículo de método
Optimizado Ex-ovo El cultivo de embriones del polluelo a etapas avanzadas de desarrollo
En este artículo
Resumen
Resumen
La investigación en anatomía, embriología y biología del desarrollo se ha basado en gran medida en el uso de organismos modelo. Con el fin de estudiar el desarrollo en embriones vivos, a menudo se utilizan organismos modelo, como el pollo. El pollo es un excelente organismo modelo debido a su bajo costo y mínimo mantenimiento, sin embargo, presentan desafíos de observación porque están encerrados en una cáscara de huevo opaca. Con el fin de ver correctamente el embrión a medida que se desarrolla, la cáscara debe estar cerrada o removida. Tanto las técnicas de ventana como las técnicas ex ovo se han desarrollado para ayudar a los investigadores en el estudio del desarrollo embrionario. Sin embargo, cada uno de los métodos tiene limitaciones y desafíos. Aquí, presentamos una técnica de cultivo ex ovo simple y optimizada para embriones de pollo que permite la observación del desarrollo embrionario desde la etapa HH 19 hasta las etapas tardías del desarrollo (HH 40), cuando muchos órganos se han desarrollado. Esta técnica es fácil de adoptar tanto en las clases de pregrado como en los laboratorios de investigación más avanzados donde se realizan manipulaciones de embriones.
Introducción
El cultivo ex ovo ha desempeñado un papel importante en el estudio del desarrollo de los pollos1, 2. Este método de cultivo se ha utilizado para estudiar enfermedades neurológicas, desarrollo de extremidades, desarrollo craneofacial y como modelo para investigar malformaciones asociadas con la diabetes 3, 4, 5.
Hay muchas variaciones de la técnica ex ovo. El enfoque más común es usar un vaso de espuma de poliestireno6,7,8 o un tazón de vidrio5. En estos métodos, la taza o tazón se forra con una envoltura de plástico para acunar el embrión, se coloca una tapa en la taza y luego se....
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Protocolo
Nota: Todos los suministros se enumeran en la Tabla 1.
1. Almacenamiento del pollo embriones
- Incubar huevos de gallina de la cepa de la especie Gallus gallus horizontalmente a 37 ° C, con aproximadamente 40% de humedad y girar los huevos una vez o dos veces al día. Volviendo huevos es importante para evitar que el embrión se adhiera a la cáscara del huevo.
- No girar el huevo en la 24 horas antes de la creación de la cultura de lo contrario el embrión se encuentra ventral a la masa de yema y puede dañarse al abrir el huevo en el paso 3. Además, mantener los huevos a 4 ° C grados para no má....
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Resultados
Este ex ovo método permite la observación de los embriones desde las primeras etapas de desarrollo (HH 19/20) a las etapas finales de desarrollo (HH 40-41) (Figura 1A y 1B). La creación de la cultura en HH 19-20 aumenta la supervivencia de los embriones en la cultura. Antes de la cabeza de giro (antes de 53 hpf) de supervivencia es muy baja en cultivo y después de la etapa 21, el embrión tiende a pegarse más a la cáscara en la eliminación de por lo menos se obtienen embriones i.......
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Discusión
Ex ovo cultivo y de ventanas ambos tienen ventajas y desafíos. Aquí se comparan las ventajas y desafíos de la taza de espuma de poliestireno ex ovo método y el método de ventanas a nuestro ex optimizado ovo método que se muestra aquí. Nuestro método permite la manipulación y la fácil observación del embrión de pollo en las etapas finales de desarrollo y nuestros refinamientos al ex ovo tradicional método 1, 2, 3 lo hacen, además, muy fácil de utilizar en las clases.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses financieros en competencia en lo que respecta a la información presentada en este manuscrito.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a Paul Poirier, el Productor de Medios, en la Universidad Mount Saint Vincent por su trabajo en la filmación y la edición de la parte de vídeo de este manuscrito. Reconocemos el de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá para su financiación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Penicilina/Estreptomicina | Sigma | P4458 | Haga pequeñas alícuotas para evitar eventos de congelación/descongelación |
| Petri cuadrada | 9,5 cm x 9,5 cm | ||
| Barco de pesaje | Fischer Scientific | 8732113 | 88 x 88 x 23 mm |
| Contenedor Ziplock | N | /A | 12 cm x 12 cm x 6 cm |
Referencias
- Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos. Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).
- Gennaro, L. D., Packard, D. S., Stach, R. W., Wagner, B. J. Growth and differentiation of....
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Reimpresiones y permisos
