La timectomía completo en ratas adultas con no invasiva La intubación endotraqueal

Resumen

La timectomía de roedores es una técnica valiosa en la investigación inmunológica. En este trabajo se describe un protocolo para la timectomía completa en ratas adultas mediante miniesternotomía junto con intubación no invasiva y ventilación con presión positiva para minimizar la morbimortalidad perioperatoria.

Resumen

La timectomía en roedores neonatales es un procedimiento establecido y fiable para estudios inmunológicos. Sin embargo, en ratas adultas, las complicaciones de hemorragia y neumotórax de interrupción pleural pueden resultar en una tasa de mortalidad significativa. Este protocolo es un método simple de la timectomía rata que utiliza un mini-intubación endotraqueal y esternotomía. La intubación se logra con un método no invasivo y fácilmente reproducible y permite la ventilación con presión positiva para prevenir el neumotórax y una vía aérea controlada que permite el tiempo suficiente para la disección timo cuidado para minimizar la interrupción pleural. A 1,5 cm incisión esternal disminuye el contacto con los vasos mediastínicos y pleura, mientras que todavía proporciona visualización completa del timo. Después de la exposición del mediastino, el timo se retira mediante disección roma con una lupa. El espacio pleural se sella entonces por el cierre de la sutura de los músculos pre-traqueales seguido por la aplicación de pegamento quirúrgico. Latórax se cierra entonces por el cierre de sutura del esternón, seguido por el cierre de la sutura de la piel. Todos timectomías estaban completas como se evidencia por inmunohistoquímica (IHC) tinción del tejido mediastinal, y la ausencia de células T ingenuas por citometría de flujo, y el procedimiento tuvo una tasa de supervivencia del 96%. Este método es adecuado cuando se desea timectomía completa con mínimas complicaciones de realizar más estudios inmunológicos en ratas adultas sin timo.

Introducción

Desde principios de la década de 1960, el timo ha sido reconocido por su papel crítico en el desarrollo de la tolerancia inmunológica central. Timectomía roedores ha demostrado ser un procedimiento esencial en la definición de la función del timo en la diferenciación de linfocitos, la auto-tolerancia y la inmunotolerancia en el contexto de trasplante de aloinjerto y la metástasis tumoral. La eliminación del timo de rata permite estudios con depleción de células T o la transferencia adoptiva de las poblaciones de células T definidas sin la reaparición de células T vírgenes nativos.

Timectomías en roedores neonatales pueden llevarse a cabo ....

Protocolo

NOTA: Todos los procedimientos experimentales sobre la utilización de las ratas se realizaron de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Duke.

1. Preparación de la intubación traqueal Cánula

1. Corte el extremo de la aguja de un 2 pulgadas 14 G aguja angiocathether con alicates de corte.
2. Apriete la luz de la aguja cerrada con unos alicates de punta fina.
3. Cortar la sección pellizcado hasta el borde de la porción lumen abierto con unos alicates de corte, y luego cortar los bordes en ambos lados de el extremo restante a 30 - 45 ° ángulo con el borde de l....

Resultados

Este procedimiento se realizó en ratas Lewis adultas (n = 26). El tiempo de operación promedio fue de 15 ± 3 min. No hubo mortalidad intraoperatoria. El tiempo de intubación media - a partir de la colocación de la rata en el aparato de intubación para el establecimiento de la ventilación - fue de 45 ± 5 seg. 24 ratas tuvieron una recuperación completa de la operación, sin evidencia de dificultades respiratorias o hemorragia a través día postoperatorio (POD) 14. Una rata desarrollado dificultad respiratoria en el POD 4 y.......

Discusión

El presente protocolo para la timectomía completa ofrece un abordaje mínimamente invasivo, con un cierre de la incisión de tres capas con aplicación de pegamento quirúrgico diseñado para minimizar las complicaciones. La eliminación completa del timo se demostró por la pérdida de células T vírgenes y por tinción IHC de tejido linfoide mediastinal para citoqueratina.

El procedimiento de la timectomía rata adulta se ha complicado por las tasas de mortalidad que van desde 1,5 hasta 20%, debido a.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
			2 pulgadas y 14 G
Microscopio de operación	Almohadilla
frecuencia cardíaca y oxigenación sanguínea para roedores con sensores de pie	Aparato Harvard	ST1 72-8010, ST1 72-8098 (sensor de pie de rata)
			Ver Figura 2
Sistema de anestesia para pequeños animales con caja de inducción, tanque de isoflurano y tanque O2	Harvard Apparatus	ST1 72-6420
Ventilador para animales pequeños con tubo	CWE	12-02000 (ventilador) y 12-04000 (conjunto de válvula externa para ratones/ratas)
Iluminador de fibra óptica de alta intensidad	Dolan Jenner	EEG 2823M
Pinzas de patrón estándar para estudiantes	Fine Science Tools	91100-16
Tijeras rectas finas	Fine Science Tools	14060-09
Tijeras de karité de punta roma	Fine Science Tools	14105-12
Retractor de Alm pequeño (para esternón)	Fine Science Tools	17008-07
Pinzas de Graefe romas	Fine Science Tools	11050-10
Pinza Dumont Fine	Science Tools	11254-20
5-0 Suturas Maxon	Ethicon
4-0 Suturas de seda (con aguja de corte)	Ethicon
6-0 Sutura de nylon	Ethicon
Pegamento de cianoacrilato (Endermil)
Gel lubricante	Akorn Animal Salud	NDC 17478-162-35

Angiocatéter de de calentamiento Zeiss Monitor de Aparato de intubación (plástico con barra de metal en la parte superior)