Aquí, creamos una pipeta de vidrio con doble función: inhibición de estructuras cerebrales profundas mediante microinyecciones de fármacos y monitorización en tiempo real de sus efectos mediante registros electrofisiológicos simultáneos.
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Artículo de método
Grabación simultánea electrofisiológico y micro-inyecciones de agentes inhibitorios en el cerebro de roedores
En este artículo
Resumen
Resumen
Aquí se describe un método para la construcción de un solo uso "injectrode" utilizando piezas comercialmente accesibles y asequibles. Un sistema de sondeo fue desarrollado que permite la inyección de un medicamento durante la grabación de señales electrofisiológicas de la población neuronal afectada. Este método proporciona una alternativa sencilla y económica a las soluciones comerciales. Una pipeta de vidrio se modificó mediante la combinación con una aguja hipodérmica y un filamento de plata. El injectrode está unido a la bomba microjeringa comercial para la administración de fármacos. Esto resulta en una técnica que proporciona retroalimentación farmacodinámica en tiempo real a través de señales extracelulares de unidades múltiples originarios desde el sitio de administración de fármacos. Como una prueba de concepto, se registró la actividad neuronal del colículo superior provocada por destellos de luz en ratas, concomitantemente con la entrega de medicamentos a través de la injectrode. La capacidad de grabación injectrode permite la caracterización funcional de la injEl sitio de reflexión favoreciendo un control preciso sobre la localización del suministro del fármaco. La aplicación de este método también se extiende mucho más allá de lo que se ha demostrado aquí, como la elección de la sustancia química cargado en el injectrode es vasto, incluyendo rastreo de marcadores para experimentos anatómicos.
Introducción
La inactivación de áreas corticales y núcleos subcorticales es importante en el estudio de las relaciones funcionales entre varias estructuras cerebrales 2-4. La literatura reciente ha empleado química de pérdida de función o técnicas criogénicas para estudiar el papel de las estructuras cerebrales 2,5. En lo que se refiere a las microinyecciones farmacológicas, pequeños volúmenes de medicamentos pueden ser administrados en una región del cerebro a una velocidad controlada y reducir al mínimo el daño colateral al tejido circundante 6,7. Esta técnica se puede utilizar para entregar agonistas específicos, agonistas inversos o antagonist....
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Protocolo
NOTA: Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con las directrices del Consejo Canadiense para la Protección de los Animales y de la junta de revisión de Ética de la Universidad de Montreal.
1. Asamblea de la pipeta de grabación por inyección
- Tire de un capilar de vidrio de aproximadamente 7 cm de largo (1 mm de diámetro exterior) con un extractor pipeta.
- Romper la punta del capilar y compruebe la abertura con un microscopio óptico. Confirmar que el diámetro interior es de entre 30 micras a 40 micras.
- Insertar un alambre de plata 7 cm de largo en el capilar de vidrio con aproximadamente 1 cm que sob....
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Resultados
La construcción de la injectrode se ilustra en la Figura 1. Un alambre de plata (C) se alimenta a una pipeta de vidrio (D) con una porción de la alambre doblado y que sobresale hacia fuera de la abertura. Una aguja de 30 G (B) se une y se sella a la abertura de la pipeta de vidrio con pegamento. Después de la pipeta se ha llenado con la sustancia de la inyección, una jeringa micro de vidrio (A) está unido a la aguja. Es importante que haya un buen cierre hermético, donde la jeringa micro conecta con la .......
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Discusión
El protocolo propuesto fue diseñado para resolver los retos derivados de los actuales métodos de inactivación reversible. En concreto, este proyecto destinada a perfeccionar los métodos utilizados para microinyecciones químicas de las sustancias que modulan la actividad neuronal, particularmente en las estructuras profundas del cerebro. Un reto técnico que emerge de este tipo de configuración es la necesidad de ambas sondas a ser colocalized en el mismo espacio restringido in vivo a fin de obtener grabaciones p.......
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Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Apoyado por subvenciones de CIHR (MOP231122) y NSERC (RGPIN-2014-06503). Nos gustaría agradecer a Geneviève Cyr por su ayuda en la preparación de experimentos y la supervisión del trabajo de laboratorio. MAL recibió una beca del Consejo de Investigación de Ciencias Naturales e Ingeniería de Canadá (NSERC).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Bomba de inyección (UltraMicroPump III) | WPI | ||
| Consola de inyección (Micro4 Controller) | WPI | #SYS-MICRO4 | |
| Jeringa Hamilton | Hamliton | (80301) 701LT 10 µ L SYR | Jeringas entre 5 y 10 μ l |
| Adhesivo plástico flexible | usado Lepage | 393915 | La forma de gel es más fácil de aplicar al eje del 30 G Aguja hipodérmica que forma un sello impermeable cuando está seca. |
| Pipetas de vidrio | WPI | #TW100F-4 | Pared fina, 1 mm OD, 0,75 mm ID con pipetas de filamento utilizadas |
| 720 Tirador de pipetas de aguja | Kopf | 720 | |
| Alambre de plata | A-M Systems, Inc. | 782500 | Desnudo 0.010" |
Referencias
- Martin, J. H., Ghez, C. Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).
- Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T.
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Reimpresiones y permisos
